Analysis of segregation in cross between wild soybean (Glycine soja) and cultivated soybean (Glycine max) based on morphology , agronomic traits and SSR marker

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

MINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY ANALYSIS OF SEGREGATION IN CROSS BETWEEN WILD SOYBEAN Glycine soja AND CULTIVATED SOYBEAN Glycine max BASED ON MORPHOLOGY, AGRONOMIC TRAITS AND SSR MARKER SUPERVISORS STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT MSc. NGUYEN TRI YEN CHI Student code: 3082585 Session: 34 2008-2013 Can Tho, 2013 MINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY ANALYSIS OF SEGREGATION IN CROSS BETWEEN WILD SOYBEAN Glycine soja AND CULTIVATED SOYBEAN Glycine max BASED ON MORPHOLOGY, AGRONOMIC TRAITS AND SSR MARKER SUPERVISORS STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT MSc. NGUYEN TRI YEN CHI Student code: 3082585 Session: 34 2008-2013 Can Tho, 2013 APPROVAL SUPERVISOR STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT Can Tho, June, , 2013 PRESIDENT OF EXAMINATION COMMITTEE i Abstract F 2 population made by cross between wild soybean and cultivated soybean was analyzed for the segregation of phenotype and genotype based on morphological characters, agronomic characters and SSR marker. The cross was generated before between the female parent Xanh Ha Bac Glycine max and the male parent Soja 182 Glycine soja. The results showed that the segregation of pod color fitted to 1:2:1 ratio. The hilum color segregated in 3:1 ratio. Four characters showed high heritability including days to flowering R1, plant height at R1, plant height at R8, and number of nodes in main stem. The population was divided into three groups, they were determinate, indeterminate and semi-indeterminate. There was diversity among these groups for plant height and number of nodes in main stem. All of six SSR loci showed the segregation ratio of 1:2:1 in F 2 population. No segregation distortion was recorded among these SSR loci. Key words: wild soybean, SSR marker, segregation. ii Content Abstract …………………………………………………………………………..i Content …………………………………………………………………………. ii 1. Introduction ……………………………………………………………….1 2. Materials and methods………………………………………………..2 2.1. Materials……………………………………………………………….2 2.2. Methods………………………………………………………………..2 2.2.1. Experiment design …………………………………………….2 2.2.2. Phenotypic characters score………………………………..2 2.2.3. Genotypic analysis…………………………………………….3 2.2.3.1. DNA extraction………………………………………………3 2.2.3.2. PCR amplification…………………………………………..3 2.2.3.3. AnalysiMINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY ANALYSIS OF SEGREGATION IN CROSS BETWEEN WILD SOYBEAN Glycine soja AND CULTIVATED SOYBEAN Glycine max BASED ON MORPHOLOGY, AGRONOMIC TRAITS AND SSR MARKER SUPERVISORS STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT MSc. NGUYEN TRI YEN CHI Student code: 3082585 Session: 34 2008-2013 Can Tho, 2013 MINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY ANALYSIS OF SEGREGATION IN CROSS BETWEEN WILD SOYBEAN Glycine soja AND CULTIVATED SOYBEAN Glycine max BASED ON MORPHOLOGY, AGRONOMIC TRAITS AND SSR MARKER SUPERVISORS STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT MSc. NGUYEN TRI YEN CHI Student code: 3082585 Session: 34 2008-2013 Can Tho, 2013 APPROVAL SUPERVISOR STUDENT Dr. TRUONG TRONG NGON NGUYEN QUANG DAT Can Tho, June, , 2013 PRESIDENT OF EXAMINATION COMMITTEE i Abstract F 2 population made by cross between wild soybean and cultivated soybean was analyzed for the segregation of phenotype and genotype based on morphological characters, agronomic characters and SSR marker. The cross was generated before between the female parent Xanh Ha Bac Glycine max and the male parent Soja 182 Glycine soja. The results showed that the segregation of pod color fitted to 1:2:1 ratio. The hilum color segregated in 3:1 ratio. Four characters showed high heritability including days to flowering R1, plant height at R1, plant height at R8, and number of nodes in main stem. The population was divided into three groups, they were determinate, indeterminate and semi-indeterminate. There was diversity among these groups for plant height and number of nodes in main stem. All of six SSR loci showed the segregation ratio of 1:2:1 in F 2 population. No segregation distortion was recorded among these SSR loci. Key words: wild soybean, SSR marker, segregation. ii Content Abstract …………………………………………………………………………..i Content …………………………………………………………………………. ii 1. Introduction ……………………………………………………………….1 2. Materials and methods………………………………………………..2 2.1. Materials……………………………………………………………….2 2.2. Methods………………………………………………………………..2 2.2.1. Experiment design …………………………………………….2 2.2.2. Phenotypic characters score………………………………..2 2.2.3. Genotypic analysis…………………………………………….3 2.2.3.1. DNA extraction………………………………………………3 2.2.3.2. PCR amplification…………………………………………..3 2.2.3.3. Analysis of PCR products………………………………..5 2.2.4. Statistics analysis………………………………………………5 2.2.4.1. Analysis of morphological characters………………..5 2.2.4.2. Analysis of agronomic characters……………………..5 2.2.4.3. Heritability of characters………………………………….5 3. Results and discussion…………………………………………………6 3.1. Inheritance of morphological traits…………………………6 3.1.1. Hypocotyl color, flower color, number of leaflets, and leaflet shape ……………………………………………….6 3.1.2. Pod color………………………………………………………….8 3.1.3. Seed coat color………………………………………………….9 3.1.4. Hilum color…………………………………………………….10 3.2. Stem types…………………………………………………………10 3.3. Heritability of agron ely similar to the sizes that was known in William cultivar. Distance between two bands was 10bp. 210bp 220bp 18 Figure 17. Band type at locus Satt495 M: ladder P1: female parent Xanh Ha Bac P2: male parent Soja 182 F1: F 1 of cross Xanh Ha Bac x Soja 182 1 13: F 2 individuals of cross Xanh Ha Bac x Soja 182 Satt495 gave two band sizes, about 245bp for Soja 182 and about 255bp for Xanh Ha Bac. Distance between two bands was 10bp. 255bp 245bp 19 Figure 18. Band type at locus Satt373 M: ladder P1: female parent Xanh Ha Bac P2: male parent Soja 182 F1: F 1 of cross Xanh Ha Bac x Soja 182 1 13: F 2 individuals of cross Xanh Ha Bac x Soja 182 Satt373 gave two band sizes,
about 254bp for Soja 182 and about 290bp for Xanh Ha Bac. Distance between two bands was 36bp. This marker could clearly separated bands. 290bp 254bp 20 All of six loci SSR segregated in Mendel ratio 1:2:1. There was no segregation of loci deviated from Mendel ratio Table 4. The segregation of these SSR markers suggested that the segregation of QTLs associated with these marker would also fitted to Mendel ratio Table 5. Table 4. Chi square test for segregation of six makers Genotype in F 2 population Marker LGs AA BB H 2 Satt197 B1 4 3 6 0,23 ns Satt231 E 3 4 6 0,23 ns Satt373 L 3 1 9 2,54 ns Satt495 L 4 3 6 0,23 ns Satt173 O 2 2 9 1,92 ns Satt243 O 1 2 10 3,92 ns Table 5. Agronomic traits associate with SSR loci Traits Locus SSR QTLs Satt197 Pl ht 20-1, Pl ht 24-5, Pl ht 24-6, Pl ht 26-7, Pl ht 26-8 Satt231 Pl ht 13-3, Pl ht 26-10, Pl ht 26-10 Satt243 Pl ht 23-4 Plant height Satt373 Pl ht 9-2, Pl ht 26-10, Pl ht 26-10 Satt243 Lflt shape 7-16, Lflt shape 6-21 Leaflet shape Satt373 Lflt shape 7-14, Lflt shape 6-19 Node number Satt197 Node num 3-5, Node num 3-6 Satt173 Pod num 25-2 Satt197 Pod num 1-5 Satt231 Pod num 1-6 Pod number Satt373 Pod num 1-9 Satt173 Sd wt 25-4 Seed weight Satt197 Sd wt 25-2 Source: http:www.soybase.org 21 4. Conclusions and suggestions 4.1. Conclusions Pod colors were tan, black, and brown. The segregation of pod color fitted to 1 : 2 : 1 ratio. The segregation of hilum color fitted to 3 : 1 ratio. Two hilum colors were black and brown. Four characters showed high heritability including days to flowering R1, plant height at R1, plant height at R8, and number of nodes in main stem. All of six SSR markers were able to distinguish Xanh Ha Bac variety from Soja 182 accession. All of six loci SSR showed the segregation ratio of 1 : 2 : 1 in F 2 population. 4.2. Suggestion Studying further on the F 2 population as well as other crosses to make exact conclusion. 22 REFERENCES Rogers, S.O. and A. Bendich. 1988. Extraction of DNA from plant tissues. In Plant molecular biology manual Section A6. Kluwer Academic Publisher, Dordreht, A6:1-11. Wang, M., L. Run-zhi, Y. Wan-ming, and D. Wei-jun. 2010. Assessing the genetic diversity of cultivars and wild soybeans using SSR markers. African Journal of Biotechnology, 931:4857-4866. Website http:soybase.org October,5 th , 2012

Fermention of mango juice by lactic acid bacteria

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

MINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY FERMENTATION OF MANGO JUICE BY LACTIC ACID BACTERIA SUPERVISOR STUDENT MSc. HUYNH XUAN PHONG NGUYEN LE VAN Student code: 3082484 Session: 34 Can Tho, 2013 APPROVAL SUPERVISOR STUDENT MSc. HUYNH XUAN PHONG NGUYEN LE VAN Can Tho, May , 2013 PRESIDENT OF EXAMINATION COMMITTEE i Abstract In order to take advantage of available fruit and contribute to the diversification of products from mango, this research was carried out in term of added value of fruit juice fermented by lactic acid bacteria LAB. Four isolates of lactic acid bacteria from mango were obtained. The results of research showed that all 10 strains of lactic acid bacteria were able to develop in pH from 1.5 to 3.5 after 2 hours of incubation at 37C with a density from 6.80 to 6.91 log cellsmL. After fermentation, the lactic acid content of 10 bacterial strains was in a range from 0.48 to 0.96 wv, density after 2 hours of incubation at 37C from 8.85 to 9.3 log cellsmL. Of which, strains isolated Lactobacillus acidophilus from Ybio yeast powder gave the best results with the following levels of lactic acid after fermentation was 0.96 wv. The appropriate ratio for fermentation mango juice was 40 for dilution and 9 for blending sugar. The suitable conditions for mango juice fermentation were as follow: at 37C for 36 hours and at 5 log cellsmL. In these conditions the sensory criteria and the density of bacteria could reach requirements for probiotic products 6 log cellsmL. These levels could identically maintain during the storage at temperature 4-6 o C for 2 weeks. Keyword: fermentation, L. acidophilus, lactic acid bacteria, mango, probiotic. ii CONTENTS Abstract ……………………………………………………………………… i Content ……………………………………………………………………….. ii 1. Introduction …………………………………………………………….. 1 2. Materials and methods ……………………………………………….. 3 2.1 Material …………………………………………………………………. 3 2.2 Methods …………………………………………………………………. 3 2.2.1 Isolation and identification of LAB isolates at genus level. …………………………………………………………………….. 3 2.2.2 Study on the tolerance at low pH of LAB isolates …. 3 2.2.3 Study on the ability to produce mango juice fermented by LAB …………………………………………………… 4 2.2.4 Study on the ratio of dilution and blending sugar …… 4 2.2.5 Study on the effects of LAB density, fermentation temperature and time ……………………………………………….. 5 2.2.6 Study on temperature and time for storage conditions ……………………………………….n indispensable necessity to humans. Growing society, human life is more and more enhanced. So, eating is not a main demand. The demand of enjoying and exploring the effect of food on health are top priority. Since, the relationship between food and dietary which have health benefits as well as help the body fight the illness has become the trend research of the nutritionist and scientists to create high-value products in terms of biological products, is known as probiotics. The probiotic concept has been defined by Fuller 1989 to mean a live microbial feed supplement which beneficially affects the host animal by improving its intestinal microbial balance. Salminen et al. 1999 proposed that probiotics are microbial cell preparations or components of microbial cells that have a beneficial effect on the health and well-being of the host. There are many probiotic products use for human, livestock, plants. It is produced and used of liquid or powder form. Lactic acid are Gram-positive bacteria Fooks et al., 1999, ferment carbohydrates into energy and lactic acid Jay, 2000. Depending on the organism, metabolic pathways differ when glucose is the main carbon source: homofermentative bacteria, whereas the heterofermentative transform a glucose molecule into lactate, ethanol and carbon dioxide Caplice and Fitzgerald, 1999 Jay, 2000 Kuipers et al., 2000. In addition, LAB produce small organic compounds that give the aroma and flavor to the fermented product Caplice and Fitzgerald, 1999. LAB are widely distributed in the nature. They could be isolated from 2 soils, water, plants, silages, waste products and also from the intestinal tract of animals and humans Axelsson, 1998. LAB are widely used in probiotic products such as yogurt, nem chua, pickle,… These products are not only used for eating but also used to treat intestinal , stomach, due to lactic acid bacteria have the ability to produce antibiotics to prevent and kill bacteria and pathogenic microbes. Juice is a good environment for the growth of bacteria and probiotic products. Fruits and vegetables are foods with health benefits because they contain antioxidants, vitamins, fiber and minerals. Moreover, they do not contain any allergens for consumers. In fruits, mango is a popular fruit and has high nutritional value. Ripe mango has attractive yellow color, sweet and sour, savoury aroma is more preferred. Mangoes contain vitamin A, C, sugar, organic acids, so mango is widely used both unripe and ripe fruit. Mangoes are eaten fresh, making juice, jam, candy. In order to take advantage of available fruit and contribute to the diversification of products from mango, this research was carried out in term for added value of fruit juice fermented by lactic acid bacteria. Objectives: Study on the conditions of mango juice fermentation by lactic acid bacteria. 3 2. MATERIALS AND METHODS 2.1 Materials – Mango: Thanh Ca and Cat Chu. – Six isolates of lactic acid bacteria from Luong Phuoc Truong 2012. – Medium: MRS broth, MRS agar. – Chemicals, equipments in Food Biotechnology laboratory. 2.2 Methods 2.2.1 Isolation and identification of LAB isolates at genus level Mango juice was contained in a flask, incubated at 37 o C for 24 – 48 hours. Transfered 1 mL mango juice fermented into a test tube containing MRS broth environment. After 24 hours, transfered bacteria from MRS broth to MRS agar environment. Continue transfer bacteria on MRS agar environment until pure. Observe the bacteria under the microscope objective lens X100. Identification through the preliminary test: Gram stain, catalase, oxidase test and dissolution of CaCO 3 . 2.2.2 Study on the tolerance at low pH of LAB isolates Transferring LAB isolates from experiment 1 into tubes containing MRS broth environment with 3 different levels of pH 1.5, 2.5 and 3.5. This was the 2 experimental factors strain and pH with 3 replications. Count the density of bacteria in individual treatments at incubation time T 0 and after 2 hours of in 81 a 3,71 b 3,43 d 1,07 c 1,10 bc 1,37 a 8,51 a 8,52 a 8,71 a 2 3,84 a 3,71 b 3,65 c 1,10 bc 1,14 b 1,4 a 8,16 b 7,34 c 6,15 d Cv 3.72 11.81 11.88 Note: The data in the table was the average of triplicates. The same characters show no difference statistically significant at 95. In the second week, the bacterial density at 3 storage temperature was reduced. However, these samples were still reached the standard of probiotic products 6 log CFUmL. The bacterial density of the sample stored at room temperature 28- 32 0 C decreased from 8.71 to 6.15 log CFUmL. In short, products stored at 4 – 6 0 C and content of lactic acid bacterial density almost stable after 2 weeks of storage. Content of lactic acid from 1.07 to 1.1 wv and bacterial density 8.51 – 21 8.16 log CFUmL. S
o, the appropriate temperature for storing product from 1 to 2 weeks was 4-6 o C. 22 4. CONCLUSION AND SUGGESTIONS 4.1 Conclusion Four LAB strains were isolated from fermented mango juice and six isolates from Luong Phuoc Truong 2012 could grow in MRS broth medium with pH from 1.5 to 3.5. All the test strains were able to ferment mango juice. L. acidophilus isolate was isolated from Ybio yeast powder produced the highest lactic acid 0.96 wv after 48 hours of fermentation. The favourable conditions for mango juice fermentation were found as follow: 40 dilution rate and 9 blending of sucrose incubation temperature at 37C for 36 hours with inoculum density at 5 log cellsmL. The product was stored at 4-6 o C in 2 weeks 4.2 Suggestions – Study a storage of products for longer time. 23 References Vietnamese Lương Phước Trường, 2012. Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn acid lactic trong sản xuất nước đu đủ lên men. Luận văn Đại học, chuyên nghành Công nghệ Sinh học. Viện NCPT Công nghệ Sinh học, Đại học Cần Thơ. English Axelsson, L., 1998. Lactic Acid Bacteria: Classification and Physiology . In: Lactic Acid Bacteria: Microbiology and Function Aspects, 2nd Edn., Salminen, S. and A. von Wright Eds.. Marcel Dekker Inc., New York, pp: 1-72. Caplice, E. and G.F. Fitzgerald. 1999. Food fermentation: role of microorganisms in food production and preservation. Int. J. Food Microbiol. 50, 131-149. Fooks, L.J., R. Fuller and G.R. Gibson. 1999. Prebiotics, probiotics and human gut microbiology. Int. Dairy J. 9, 53- 61. Fuller, R. 1989. A review: Probiotics in man and animals. J. Appl. Bact. 66, 365-378. Jay, J.M. 2000. Fermentation and fermented dairy products. In Modern Food Microbiology, 6th edition. An Aspen Publication, Aspen Publishers, Inc. Gaithersburg, USA, , pp. 113-130. Kuipers, O.P., G. Buist and J. Kok. 2000. Current strategies for improving food bacteria. Res. Microbiol. 151, 815-822. Mattila-Sandholm, T., P. Myllarinen, R. Crittenden, G. Mogensen, R. Fonden, and M. Saarela, 2002. 24 Technological challenges for future probiotic foods. Int. Dairy J. 12, 173-182. Salminen, S., A. Ouwehand, Y. Benno and Y.K. Lee. 1999.Probiotic: how should they be defined? Trends Food Sci. Techn. 10, 107-110.

Fermentation of carrot juice by lactic acid bacteria

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

MINISTRY OF EDUCATION TRAINING CAN THO UNIVERSITY BIOTECHNOLOGY RESEARCH DEVELOPMENT INSTITUTE SUMMARY BACHELOR OF SCIENCE THESIS THE ADVANCED PROGRAM IN BIOTECHNOLOGY FERMENTATION OF CARROT JUICE BY LACTIC ACID BACTERIA SUPERVISOR STUDENT MSc. HUYNH XUAN PHONG NGUYEN THI AI XUAN Student code: 3082569 Session: 34 2008- 2013 Can Tho, 2013 APPROVAL SUPPERVISOR STUDENT MSc. HUYNH XUAN PHONG NGUYEN THI AI XUAN Can Tho, May , 2013 PRESIDENT OF EXAMINATION COMMITTEE i Abstract This study was carried out in term to contribute for added value of the available, inexpensive and high nutrition raw materials as well as to diversify the production with good characteristics. The study was divided into 2 stages. In the first stage, isolation of the strain for fermentation was done from the nature fermented carrot juice. Four isolates of lactic acid bacteria were compared with other 6 strains from products of digested powder Luong Phuoc Truong, 2012. A strain of Lactobacillus helveticus gave the best results 1.46 wv. In the second stage, the fermented carrot juice processing was tested with the selected lactic acid bacteria. Of four testing media, carrot juice with 15 wv of saccharose and 30 dilution ratio was found as the best medium. The favorable conditions for fermented carrot juice were determined based on the results of sensory evaluation and bacterial density determination and they were found as follow: at 5 log cellmL of the bacterial inoculum, for 24 hours of fermentation time and at 37C. The result of storage testing showed that suitable temperature for product storage was 4-6C, sensory evaluation 4.21 and bacterial density 7.13 log CFUmL of final product maintained after 4 weeks. Key words: carrot juice, lactic acid bacteria, Lactobacillus helveticus, probiotic ii CONTENTS 1. INTRODUCTION ……………………………………………………… 1 2. MATERIALS AND METHODS…………………………………… 3 2.1. Materials …………………………………………………………….. 3 2.2. Methods ……………………………………………………………… 3 3 RESULTS AND DISCUSSION…………………………………….. 7 3.1 Isolation of lactic acid bacteria ………………………………… 7 3.2 Study on low pH tolerance of isolates ……………………….. 8 3.3 Study on lactic acid fermentation ability of isolates in carrot juice………………………………………………………………..10 3.4 Identification of the selected lactic acid bacteria by molecular technique ……………………………………………………11 3.5 Study on the effect of dilution ratio and sugar content….12 3.6 Studying the effect of inoculums density, temperature and time of lactic acid fermentation……………………………….14 3.7 Study on temperature and time of storage ………………….16 4. CONCLUSIONS AND SUGGESTIONS ……………………….18 REFERENCES………….to pH 8.2. Viable cell counts CFUmL were determined by the standard plate method with MRS medium after 48 hours incubation at 30C. 2.2.4 Identification of the selected lactic acid bacteria by molecular technique The bacterial isolate was identified by sequence analysis of partial 16S rRNA gene. A couple of primer including forward primer 8F: 5-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 and reverse primer 1492R: 5-GGC TAC CTT GTT ACG ACT T-3 were employed to amplify the target gene through PCR technique. DNA sequence of bacterial isolate was determined by DNA machine. Nucleotide sequence was aligned and compared with the data obtained from Gene Bank. 2.2.5 Study on the effect of dilution ratio and sugar content The following variants differing with sugar levels: juice with the addition of 6, 9, 12 and 15 sugar and variants differing with dilution ratio 0, 10, 20 and 30 vv. Fermentation experiments were conducted in test tubes, each containing 40 mL of pasteurized carrot juice. All samples were inoculated with a 24 hours culture 5 log cellmL and incubated at 37C for 48 hours. The fermentation dynamics was analyzed on basis of the most important physico-chemical reducing sugar content, pH, lactic acid content and microbiological parameters numerical evolution of the microbial inoculum at 48 hours. In addition, sensory evaluation of the fermented carrot juice show a statistically significant effect of dilution ratio and sugar content on its total quality 6 2.2.6 Studying the effect of initial inoculum density, temperature and time of fermentation The activity was designed with three factors: LAB density at 10 3 , 10 5 and 10 7 cellsmL fermentation temperatures at: room temperatures, 30C and 37C fermentation time at: 24, 36 and 48 hours. Total number of treatments was 3 x 3 x 3 27 treatments. The total number of experimental units was 27 treatments x 2 replicates 54 units. Carrot juice was pasteurized by NaHSO 3 140mgL in 20 minutes and then transferred into tube. Inoculate 0.4 mL of bacterial suspension into tube containing 40 mL of pasteurized carrot juice and incubated room temperatures, 30C and 37C, respectively. Measure Brix level, pH, acid lactic content and evaluated sensory after fermentation 24, 36, and 48 hours. 2.2.7 Study temperature and time of storage From previous activities, selected the favorable conditions including: isolate strains, inoculum density, sugar content Brix, dilution ratio, temperature and time of fermentation to produce carrot juice at high quality. After fermentation, fermented carrot juice tubes were stored at the different temperature conditions: at room temperature between 28C and 34C, in the cabinet cooler about 20C, in the refrigerator 4-6C about 4 weeks of storage. Found the better storage conditions. 2.2.8 Statistical data analysis The statistical data were analyzed by Microsoft Office Excel 2003 and Statgraphics centurion XV USA software. 7 3 RESULTS AND DISCUSSION 3.1 Isolation of lactic acid bacteria All pure isolates were classically defined by observing macro and micro morphology. As the result, 4 isolates of lactic acid bacteria were isolated from 2 kinds of carrot Dalat and Chinese. Colonies of all isolates were round, smooth, grayish white. Because of the differentiation of collected samples, the cell morphology was various as shown in Table 6. Moreover, 4 isolates were characterized in Gram positive, lack of calatase and oxydase, produced clear zone around colonies in medium containing CaCO 3 . The result of Gram staining of 2 representative isolates is described in Figure 14. Figure 14. Gram staining of isolates Two lactic acid bacteria were isolated from Dalat carrot. DL52 were defined as V rod-shaped whereas DLII3 looked like rod-shaped. The isolates TQ13 and TQ25 from Chinese carrot were rod-shaped. Four isolates were characterized of basically characteristics of lactic acid bacteria, they had varieties of both morphology and isolated samples. 8 Table 6. Cell morphology of isolates Numbers Sam ble was average value of triplications. Difference value of statistics only had meaning in the column the average values with the same letter were not significant at 95 probability. At 20-25C and 28-34C were suitable ranges for bacteria to grow and develop. After using all soluble sugar and nutrients as well as increasing lactic acid content, the bacteria started to be inhibited and died, so Lb. helveticus density was low than 6 log cellsmL in the second week. On the other hand, Lb. helveticus density was still higher than 6 log cellsmL after 4 weeks of storage at 4-6C. There were significant differences in sensory after 4 weeks of storage at 4- 6C. After 4 weeks of storage, fermented carrot juice did not change the value of taste and color, while others had negati
ve sour taste. Therefore, temperature 4-6C in four week was recommended to store fermented carrot juice. 18 4. CONCLUSIONS AND SUGGESTIONS 4.1 Conclusions Molecular analysis showed that Pro belonged to Lb. helverticus. It gave the best results 1.46 wv acid content 30 wv of dilution ratio and 15 wv of sugar content conditions applied for the fermentation. The appropriate environmental conditions for bacterial development were to incubate at 37C for 24 hours with initial cell densities of 5 log CFUmL A range of storage temperature 4-6C ensured product qualities, and maintained bacterial populations for 4 weeks. 4.2 Suggestion Because of scope and limitation of graduate thesis, the project just achieved some research findings. Consequently, this project was able to develop several further researches can be implemented. – Studying the proper storage conditions and maximum storage time. 19 REFERENCES Vietnamese Lương Phước Trường. 2012. Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn acid lactic trong sản xuất nước đu đủ lên men. Luận văn nghành Công nghệ Sinh học, Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học- Đại học Cần Thơ. Nguyễn Thị Hiền. 2006. Công nghệ sản xuất mì chính và các sản phẩm lên men cổ truyền. Nxb Khoa học và Kỹ thuật, trang 209-211. English Beom, J., S. Yong and H. Myung, 1998. Antioxidant activity of vegetables and blends in iron catalyzed model system. J. Food Sci. and Nutr., 3: 309-314. Guarner F. and G.J Schaafsma, 1998. Probiotics. International Journal of Food Microbiology 39, 237-238. Luckow, T. and C. Delahunty. 2004. Which juice is healthier? A consumer study of probiotic non-dairy juice drinks. Food Qual. Prefer. Marteau P., de Vrese M., Cellier C.J., and Schrezenmier J., 2001. Protection from gasterointestinal deseases with the use of probiotics. Am J Clin Nutr Mattila-Sandholm, T., P.Myllarinen, R. Crittenden, G. Mogensen, R. Fonden and M.Saarela. 2002. Technological challenges for future probiotic foods. Int. Dairy J. 3:173-182. Yoon K.Y., Woodams E. E. and Hang Y.D. 2004. Probiotication of tomato juice by lactic acid bacteria. J. Microbiol. 424: 315-318. 20 Valentina, T and G. Simone. 2012. Health-Promoting Properties of Lactobacillus helveticus. Front Microbiol 3: 392.

Tuyển chọn tổ hợp vi khuẩn dạ cỏ có khả năng phân giải bã mía trong điều kiện in vitro

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH VI SINH VẬT HỌC TUYỂN CHỌN TỔ HỢP VI KHUẨN DẠ CỎ CÓ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI BÃ MÍA TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: SINH VIÊN THỰC HIỆN: ThS. VÕ VĂN SONG TOÀN NGUYỄN THANH SON TS. HỒ QUẢNG ĐỒ MSSV: 3103982 PGs. TS. TRẦN NHÂN DŨNG LỚP: VI SINH VẬT HỌC K36 Cần Thơ, Tháng 052013 Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 1 SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS. Võ Văn Song Toàn Nguyễn Thanh Son CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 2 TS. Hồ Quảng Đồ CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 3 PGs. TS. Trần Nhân Dũng XÉT DUYỆT CỦA BỘ MÔN . Cần thơ, ngày tháng năm 2013 TRƯỞNG BỘ MÔN Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học LỜI CẢM TẠ Trong suốt quá trình thực hiện đề tài Luận văn tốt nghiệp ở Trường Đại học Cần Thơ, bên cạnh những thuận lợi còn có nhiều khó khăn, thất bại. Không những bản thân cố gắng, tìm tòi nghiên cứu mà còn nhờ vào sự động viên, khích lệ của gia đình, sự hướng dẫn và giúp đỡ của thầy cô, bạn bè đó là nguồn động lực rất lớn giúp tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình đến Tiến sĩ Hồ Quảng Đồ, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại Học Cần Thơ, Phó giáo sư – Tiến sĩ Trần Nhân Dũng, Giám đốc Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Cần Thơ, Thạc sĩ Võ Văn Song Toàn người thầy cố vấn chuyên môn của tôi – đã truyền đạt kinh nghiệm và kiến thức giúp tôi có định hướng nghiên cứu và áp dụng vào thực tiễn cuộc sống, đồng thời đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành tốt đề tài nghiên cứu này. Xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến tất cả quý Thầy Cô Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học đã tận tình truyền dạy cho tôi kiến thức, giúp tôi có những kiến thức hữu ích phục vụ cho việc thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn các bạn sinh viên Bùi Thị Ngọc Hân, Nguyễn Thị Xuân Thảo, Nguyễn Thị Như Anh, anh Lý Tuấn Cường học viên cao học K19 cùng các anh chị học viên cao học, các bạn sinh viên của phòng thí nghiệm CNSH Enzyme đã nhiệt tình giúp đỡ và chia sẻ nhiều kinh nghiệm quý báu trong suốt thời gian tôi học tập và thực hiện đề tài. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình và người thân đã động viên, khích lệ và luôn ủng hộ tôi về mặt vật chất cũng như tinh thần trong suốt thời gian qua để tôi vững tin thực hiện đề tài nghiên cứu này. Kính chúc quý vị nhiều sức khỏe, hạnh phúc và thành đạt. Xin trân trọng cảm ơn Cần Thơ, ngày 02 tháng 04 năm 2013 Nguyễn Thanh Son Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học i TÓM LƯỢC Đề tài Tuyển chọn tổ hợp vi khuẩn có khả năng phân giải bã mía trong điều kiện in vitro được thực hiện với mục đích nghiên cứu về đường tăng trưởng của 6 dòng vi khuẩn dạ. 1948, Studies on ruminant saliva. I. The composition and output of sheeps saliva. Biochem. J.43, pp. 99-109 Melo, I.R., M.F. Pimentel., C.E. Lopes and G.M.T. Calazan. 2007. Application of fractional factorial design to levan production by Zymomonas mobillis. Brazil J of Microbiol, 38:45-51. Menke K.H., L. Raab, A. Salewski, H. Steingass, D. Fritz and W. Schneider 1979, The estimation of the digestibility and metabolizable energy content of ruminant feedsuffs from the gas production when thay are incubated with rumen liquor in vitro, J. Agric. Sci. Camb 92, pp. 217-222 Menke, K. H. and H. Steingass 1988, Estimation of the energetic feed value obtained from chemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid, Anim. Res. Devel. 28, pp. 7-55. Mohamed, S.A.S., A.M.Y. Magdi., F.H. Francis and A.N.E. Moustafa. 2010. Production of cellulase on Low-Cosr medium by Bacillus subtillis KO strain. World Appl Sci J, 81:35-42. Nataraja M.B., U. Krishnamoorthy and P. Krishnappa 1998, Assessment of rumen in vitroincubation gas production technique and chemical analyses by detergent system to predict metabolisable energy content in mixed diets of lactating cows, Anim. Feed Sci. Technol. 74, pp. 169-177. Oyeleke, S. B. and T. A: Okusanmi. 2008. Isolation and characterization of cellulose hydrolysing microorganism from the rumen of ruminants. Academic Journals. Pell A. N. and Schofield P. 1993, Computerised monitoring of gas production to measure forage digestion, J. Dairy Sci. 76, pp. 1063-107. McCarthy R.D. and Kesler E.M.. 1956. Relation between Age of Calf, Blood Glucose, Blood and Rumen Levels of Volatile Fatty Acids, and in Vitro Cellulose Digestion1 and 2. Department of Dairy Science, Pennsylvania State University, University Park Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học 61 Wasserman R.H, Duncan W, Churchill E.S and Huffman C.F. 952. The Effect of Antibiotics on in Vitro Cellulose Digestion by Rumen Microorganisms 1 and 2. Departments of Bacteriology, Agricultural Chemistry and Dairy, Michigan Agricultural Experiment Station, East Lansing. Rani D.S, Thirumale and S. N. and K. 2004. Production of cellulase by Clostridium papyrosolvens. pp 56 65. Ray, A.K., A. Bairagi, K.S. Ghosh and S.K. Sen, 2007. Optimization of fermentation conditions for cellulase production by Bacillus subtilis CY5 and Bacillus circulans TP3 isolated from fish gut. Acta Ichthyologica ET Piscatoria, 371: 47-53. Rine, M., Olt A., Nousiainen J, Seppala A, Tuori M, Paul C, Fraser M.D and Huhtanen P. 2006, prediction of legume silage digestibility from various laboratary methods, Grass Forage Sci. 61: 354-362 Ryckeboer J., Megaert J., Coosemans J., Deprins K. and Swings J. 2003. Microbiological aspects of biowaste during composting in a monitored compost bin. Journal of Apply Microbiology, 94:127-137. Gill S.S., Conrad H.R. and Hibbs J.W. 1969. Relative Rate of in Vitro Cellulose Disappearance as a Possible Estimator of Digestible Dry Matter Intake. Department of Dairy Science, Ohio Agricultural Research and Development Center. Sudhakaran Pillai, M., R. Vasudev. 2001. Applications of Coir in Agricultural Textilis. Proceeding International Seminar On Technical Textiles. Taled, A., Khadiga A.A, Mashhoor W.A., Sohair A.N, Sharaf M.S, Abdel A and Hoda H.M. 2009. Nutritional and environmental factors affecting cellulase production by two strains of cellulolytic Bacilli. Australian J Agricultural Biological Chemistry, 49:1091-1097. Tang, X., He G, Chen Q, Zhang X and Ali M. 2004. Medium optimization for the production of thermal stable beta-glucanase by Bacillus subtilis ZJF-1A5 using response surface methodology. Bioresour Technol, 932:175-181. Teeri, T.
T. 1997. Crystalline cellulose degradation: new insight into the function of cellobiohydrolases. Trends Biotechnol. 15:160-167. Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học 62 Ti e a letter are significantly different Tukey 95 Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level 99,80 Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học Results for: ADL Source DF SS MS F P Factor 9 17,7265 1,9696 27,23 0,000 Error 20 1,4465 0,0723 Total 29 19,1730 Pooled StDev 0,2689 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping adlNT9 3 2,8513 A adlNT10 3 2,7835 A B adlNT8 3 2,4836 A B adlNT6 3 2,4318 A B adlNT5 3 2,0577 B C adlNT4 3 1,6234 C adlNT7 3 1,6157 C adlNT3 3 1,3475 C D adlNT1ĐC- 3 0,6499 D adlNT2ĐC 3 0,6446 D Means that do not share a letter are significantly different Tukey 95 Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level 99,80 Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học Results for: Cellulose Source DF SS MS F P Factor 9 40,5429 4,5048 158,13 0,000 Error 20 0,5698 0,0285 Total 29 41,1126 Pooled StDev 0,1688 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping celluloseNT9 3 5,0363 A celluloseNT10 3 4,9583 A celluloseNT8 3 4,8164 A B celluloseNT6 3 4,8031 A B celluloseNT5 3 4,4433 B C celluloseNT7 3 4,1933 C celluloseNT4 3 4,1662 C celluloseNT3 3 3,5040 D celluloseNT1ĐC- 3 1,8037 E celluloseNT2ĐC 3 1,7857 E Means that do not share a letter are significantly different Tukey 95 mm Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level 99,80 Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học Results for: hemicelluloses Source DF SS MS F P Factor 9 56,86033 6,31781 24146,39 0,000 Error 20 0,00523 0,00026 Total 29 56,86557 Pooled StDev 0,0162 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping hemicelluloseNT10 3 5,3089 A hemicelluloseNT9 3 5,2855 A hemicelluloseNT8 3 5,2820 A hemicelluloseNT6 3 5,2257 B hemicelluloseNT5 3 4,6130 C hemicelluloseNT4 3 4,3826 D hemicelluloseNT7 3 4,3665 D hemicelluloseNT3 3 3,1224 E hemicelluloseNT2ĐC 3 1,6505 F hemicelluloseNT1ĐC- 3 1,6395 F Means that do not share a letter are significantly different Tukey 95 Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level 99,80 Luận văn tốt nghiệp Đại Học Khóa 2010-2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Vi Sinh Vật Học Viện NCPT Công Nghệ Sinh Học Results for: Lignin Source DF SS MS F P Factor 9 17,7084 1,9676 141,52 0,000 Error 20 0,2781 0,0139 Total 29 17,9865 Pooled StDev 0,1179 Grouping Information Using Tukey Method NT N Mean Grouping ligninNT9 3 2,8513 A ligninNT10 3 2,7835 A B ligninNT8 3 2,4833 B C ligninNT6 3 2,4273 C ligninNT5 3 2,0567 D ligninNT4 3 1,6234 E ligninNT7 3 1,6157 E ligninNT3 3 1,3475 E ligninNT1ĐC- 3 0,6499 F ligninNT2ĐC 3 0,6446 F Means that do not share a letter are significantly different Tukey 95 Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level 99,80

Phân lập, tuyển chọn và nhận diện vi khuẩn Bacillus Subtilis từ bã bùn bia

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NHẬN DIỆN VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TỪ BÃ BÙN BIA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS. TS. TRẦN NHÂN DŨNG NGUYỄN MINH THÙY MSSV: 3084035 LỚP: CNSHTT K34 Cần Thơ, Tháng 52013 Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học LỜI CẢM TẠ Trong quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp em đã nhận được rất nhiều sự hỗ trợ quý báu. Xin chân thành cảm ơn đến gia đình ba mẹ và anh chị đã hỗ trợ về mọi mặt cho em trong thời gian làm đề tài. Xin chân thành cảm ơn Thầy Trần Nhân Dũng đã tận tình giúp đỡ, hướng dẫn em hoàn thành luận văn này Xin chân thành cảm ơn Cô Bùi Thị Minh Diệu, Thầy cố vấn Nguyễn Hữu Hiệp và tất cả các thầy cô đã giúp đỡ và chỉ dạy tận tình cho em trong suốt quá trình học Đại Học. Xin chân thành cảm ơn các anh, chị, các cán bộ của Phòng thí nghiệm vi sinh vật, Phòng thí nghiệm Sinh học phân tử, Phòng thí nghiệm Hóa sinh thực phầm đã nhiệt tình giúp đỡ và hỗ trợ em trong thời gian qua. Xin chân thành cảm ơn các bạn lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến khóa 34, các em khóa dưới và đội văn nghệ của viện đã nhiệt tình giúp đỡ và hỗ trợ em trong thời gian qua. Xin chân thành cảm ơn đến tất cả sự hỗ trợ và giúp đỡ quý báu. Sinh viên Nguyễn Minh Thùy Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS.TS. Trần Nhân Dũng Nguyễn Minh Thùy DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học TÓM LƯỢC Vi khuẩn Bacillus subtilis là dòng vi khuẩn có nhiều ứng dụng rộng rãi trên nhiều lĩnh vực như y học, chế biến thực phẩm, chăn nuôi thú y, nuôi trồng thủy sản và đặc biệt là xử lý ô nhiễm môi trường, giúp phân hủy các chất cặn bã, bùn đáy … Đề tài Phân lập, tuyển chọn và nhận diện vi khuẩn Bacillus subtilis từ bã bùn bia và nước thải cho kết quả phân lập được 21 dòng vi khuẩn, trong đó 9 dòng phân lập từ bã bùn bia Bs1, Bs2, Bs3, Bs4, Bs5, Bs6, Bs7, Bs8, Bs9 và 12 dòng phân lập từ nước thải của hố bùn bia BN1, BN2, BN3, BN4, BN5, BN6, BN7, BN8, BN9, BN10, BN11, BN12 Trong số 21 dòng vi khuẩn đã phân lập được, có 16 dòng đạt yêu cầu khi nhuộm Gram Gram dương. Sau khi kiểm tra các hoạt tính sinh hóa như Catalase, Amylase, Methyl Red, Protease và nhuộm bào tử có 8 dòng vi khuẩn Bs1, Bs2, Bs4, BN1, BN2, BN5, BN9, BN12 đạt yêu cầu có bào tử và có khả năng tạo các enzyme trên và phản ứng với thuốc thử Methyl Red. Tất cả kết quả được mang so sánh với vi khuẩn Bacillus subtilis phòng sinh hóa thực phẩm là đối chứng dương. Tám dòng vi khuẩn này được thực hiện phản ứng PCR Polymerase chain reaction với cặp mồi 16S-9F và 16S-1525R. Phổ điện di cho kết quả 8 dòng vi khuẩn phân l Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học John G. Holt, Noel R.Krieg, Peter H.A.Sneath, James T.Staley, Stanley T.Wiliams, Bergeys manual of determinative Bacterology, 1994, ninth edition, pp.559. Gatesoupe FJ. 1999. The use of probiotics in aquaculture: review. Aquaculture, 180, pp. 147-165. Goebel, U. B., A.Geiser E. J. Stanbridge 1987, Oligonucleotide probes complementary to variabel regions of ribosomal RNA discriminate between Mycoplasma species, J. Gen. Microbiol., 133, pp. 1969-1974. Green D.H, Wakeley PR, Page A, Barnes A, Baccigalupi L, Ricca E Cutting SM. 1999, Characterization of two Bacillus probiotics.Appl.Environ.Microbiol.659, pp.4288-4291. Lane, D. B., B. Pace, G.J.Olsen, D.A.Stahl, M.L. Sogin N. R. Pace 1985, Rapid determination of 16S ribosomal RNA sequences for phylogenetic analysis, Proc. Nalt. Acad. Sci. USA, 82, pp.6955-6959. Leser T.D., A. Knarreborg and J. Worn .2007. Germination and outgrowth of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis spores in the gastrointestinal tract of pigs. Appl. Environ. Microbiol, 09699, pp.1364-5072. Loughney, K.,E. Lund and J. E. Dahlberg. 1982. tRNA genes are found between the 16S and 23S genes in Bacillus subtilis. Nucleic Acid Res., 10, pp.1607-1624. Nwaogu L.A., G.O.C. Onyeze and R.N. Nwabueze. 2008. Degradation of diesel oil in a polluted soil using Bacillus subtilis. African Journal of Biotechnology. 712, pp.1939-1934. Oliver Hekele. 2007. Atomic Force Microscopy of Bacillus subtilis. Vienna University of technology. Panuwan C., Achalee O., Khanungkan K., Ekachai C. and Saisamorn L. 2002. Characterization of protease of Bacillus subtilis strain 38 isolated from traditionally fermented soybean in Northern Thailand. Science Asia. 28, pp.241-245. Perez A.R., A. Abanes-De Mello and K.Poliano. 2000, SpoIIB Localizes to Active Sites of Septal Biogenesis and Spatially Regulates Septal Thinning during Engulfment in Bacillus subtilis. Journal of Bacteriology. 1824, pp.1096-1108. Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học Priest, F. G., 1977. Extracellular enzyme synthesis in the genus Bacillus. Bacteriol. Rev., 41, pp.711-753. Priest, F.G. 1993, Systematics and ecology of Bacillus. In:Sonenshein A.L, Hoch J., Losick E. ed, Bacillus subtilis and other Gram positive bacteria: biochemistry, physiology, and molecular genetics, American Society for Microbiology, Washington, D.C., pp. 3-16. Slepecky Ralph A. and H. Ernest Hermphill .2006. The genus Bacillus- Nonmedical. In The Prokaryotes, ed. Martin Dworkin, Stanley Falkow, Vol.3, Springer, pp.530-562. Patricia S. Vary, Rebeckka B., Tobias F., Friedhelm M., Manfred R., Wolf-Dieter D., Dieter J., 2007. Bacillus megaterium-from simple soil bacterium to industrial protein production host. Appl Microbiol Biotechnol, 76:957-967, pp.958-959 Xu Dong and Jean Charles côté. 2003. Phylogenetic relationship between Bacillus species and related genera inferred from comparision of 3 end 16S rDNA and 5 end 16S 23S ITS nucleotide sequences. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. Trang web http:congnghesinhhoc24h.comtai-lieubuoc-dau-nghien-cuu-tan-dung-ba-men- bia-de-san-xuat-nuoc-cham-len-men-556.html 26122012 http:congnghesinhhoc24h.comtai-lieuphan-lap-khao-sat-dac-diem-cua-vi- khuan-bacillus-subtilis-va-tim-hieu-405.html 26122012 http:blog.phuthinh.co201208ba-ruou-bia-lam-thuc-an-chan- nuoi.html.ULYqIeR0n84 http:congnghesinhhoc24h.com 26122012 http:menvisinh.orgcontentbacillus-subtilis-va-dac-tinh-tri-lieu-0 212013 http:baigiang.violet.vnpresentshow?entryid6860908 24012013 http:uv-vietnam.com.vnNewsDetail.aspx?newsId1097 752013 PHỤ LỤC Phụ lục 4.1.7 Kết quả phân tích thống kê hoạt tính enzyme protease: Multiple Range Tests for Enzyme Protease by Dong Method: 95.0 percent LSD Dong Count Mean
Homogeneous Groups Bs2 3 0.5 Xa BN1 3 0.8 Xb Bs1 3 0.8 Xb BN2 3 1.0 Xc Bs4 3 1.01 Xc BN12 3 1.1 XXcd BN9 3 1.2 Xd BN5 3 1.25 Xd Contrast ACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGG TCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGG TGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGT CTTGACATCCTCTGACAACTCTAGAGATAGAGCGTTCCCCCTTCGGGG GGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTTGTCGTCAGCCTCGTGTCGT GAGATGTTGGGGTTAAGGTCCCCGCACGGAGCGCAACCCCTTGCATC CTTTAGGTTTTGG – Kết quả giải trình tự dòng BN9, Bacillus megaterium 99, trình tự 16S rRNA: ATAGACGGCCATGGCTAATAAAATGCAAGTCGAGCGAACTGATTAGA AGCTTGCTTCTATGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGG CAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGAAGCTAATA CCGGATAGGATCTTCTCCTTCATGGGAGATGATTGAAAGATGGTTTCG GCTATCACTTACAGATGGGCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGT AACGGCTCACCAAGGCAACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATC GGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCG CGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAA GAACAAGTACAAGAGTAACTGCTTGTACCTTGACGGTACCTAACCAG AAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTG Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học GCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTT TCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTG GAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGAAAAGCGGAATTCCACGT GTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAG GCGGCTTTTTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGA GCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGT GCTAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATT AAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGA ATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAA GCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACTCTAG AGATAGAGCGTTCCCCCTTCGGGGGGACAGAGTGACAGGTGGGTGCA TGGGTTGTCGTCAGCCTCGTGTCGTGAAGATGTTGGGGTTAAGTCCCC GCCAACGAGGCGGCAACCCCTTTGCATCTTTAAGCCTTGGCCCCAAGA GCCAACCTCA – Kết quả giải trình tự dòng BN12, Bacillus aryabhattai 99, theo trình tự 16S rRNA: TCAAAGGCCAACTTTTACCATGTAAGTCGTAACAAGGTAACCGTAAG GATGCTGACGAGTGGCGGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTAAGACT GGGATAACTTCGGGAAACCGAAGCTAATACCGGATAGGATCTTCTCC TTCATGGGAGATGATTGAAAGATGGTTTCGGCTATCACTTACAGATGG GCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCA ACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGA GACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGC AATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCT TTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACAAGAGTA ACTGCTTGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTAC GTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAAT TATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAA AGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGA GTGCAGAAGAGAAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTA GAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTTTGGTCTGTAA Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh Học CTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACC CTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTCG ATCGACGATCGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCTCCTGGGGA GTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCAC AAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTA CCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACTCTAGAGATAGAGCGTTCCCCTT CGGGGGACAGAGTGAAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCG TGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGT TGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAAC

Nghiên cứu môi trường thích hợp nuôi cấy nấm Aspergillus Fumigatus sinh tổng hợp Phytase cao

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU MÔI TRỜNG THÍCH HỢP NUÔI CẤY NẤM Aspergillus fumigatus SINH TỔNG HỢP PHYTASE CAO CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS. DƠNG THỊ HƠNG GIANG NGUYỄN THỊ NGỌC ĐIỆP MSSV: 3083916 LỚP: CNSHTT K34 Cần Thơ, Tháng 052013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS. Dương Thị Hương Giang Nguyễn Thị Ngọc Điệp DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN .. Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG CẢM TẠ Để hoàn thành Luận văn tốt nghiệp Đại học thì sự cố gắng của bản thân tôi là chưa đủ, tôi đã nhận được sự ủng hộ và giúp đỡ nhiệt tình của rất nhiều người. Lời đầu tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cô Dương Thị Hương Giang đã tận tâm hướng dẫn, định hướng cho tôi thực hiện đề tài, truyền đạt kiến thức và tạo mọi điều kiện cho tôi trong suốt thời gian qua. Xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến bạn Nguyễn Văn Tính đã tận tình hướng dẫn về chuyên môn, luôn sẵn sàng chia sẽ những kinh nghiệm và đóng góp những ý kiến quý báo, tạo điều kiện thuận lợi nhất giúp tôi hoàn thành luận văn này. Trân trọng cám ơn bạn Trần Nguyễn Nhật Khoa, anh Tạ Duy Tiên và chị Nguyễn Thị Xuân Dung, cùng các anh chị em cùng làm việc trong phòng thí nghiệm Công nghệ Enzyme đã tận tình giúp đỡ, động viên và đóng góp ý kiến cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Xin cám ơn các anh, chị quản lý phòng thí nghiệm Thực Phẩm cũng như các phòng thí nghiệm thuộc Viện NCPT Công nghệ Sinh học là những người đã hỗ trợ trực tiếp trong việc hướng dẫn và cách thức sử dụng trang thiết bị phục vụ cho đề tài. Tôi rất biết ơn PGs.Ts. Nguyễn Hữu Hiệp – Cố vấn học tập lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến khóa 34 và tập thể lớp đã quan tâm, chia sẻ và giúp đỡ tôi vượt qua những khó khăn trong thời gian vừa qua. Ngoài ra, tôi xin ghi nhận và cám ơn những thầy cô Viện NCPT Công nghệ Sinh học cùng tất cả quý thầy cô trường Đại Học Cần Thơ đã nhiệt tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức chuyên môn và tạo những điều kiện tốt nhất cho sinh viên chúng tôi được tiếp cận và tham gia nghiên cứu khoa học, từ đó tạo tiền đề vững chắc để đề tài luận văn tốt nghiệp được tiến hành. Cuối cùng, với tất cả lòng kính trọng và biết ơn, tôi gửi lời tri ân chân thành và sâu sắc nhất đến Cha Mẹ và anh chị em trong gia đình đã luôn hết lòng yêu thương, giúp đỡ và tạo điều kiện để tôi có thể hoàn thành tốt luận văn cũng như khóa học này. Kính chúc sức khỏe, hạnh phúc và thành đạt. Xin trân trọng cám ơn. Cần Thơ, ngày 15 tháng 05 năm 2013 Nguyễn Thị Ngọc Điệp Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học i TÓM LỢC Phytase là enzyme có khả năng giải phóng phosphorus từ phytate, khiến phosphorus trở nên dễ hấp thu nên được dùng phổ biến trong thức ăn gia súc. ần đây, t rong ph ng th nghiệm Công nghệ en yme , Viện NCPT Công nghệ Sinh học chủng nấm m i củ Aspergillus fumigatus được xem là nguồn tiềm năngôi trường. Phytase được bổ sung vào khẩu phần thức ăn của lợn có chứa bắp và đậu tương sẽ chuyển đổi được khoảng một phần ba lượng phosphate từ dạng không hấp thu sang dạng hấp thu được Cromwell et al., 1993. Các thí nghiệm tiếp theo của Cromwell et al. 1995, Yi et al. 1996 và OQuinn et al. 1997 cũng cho kết quả tương tự. Bên cạnh đó, phytase được dùng trong chế biến thức ăn cá để làm giảm lượng phosphorus thải ra môi trường nước và giảm chi phí bổ sung phosphorus vô cơ vào thức ăn cho cá Kerovuo, 2000. Vấn đề sử dụng phytase bổ sung vào thức ăn chăn nuôi đã được phê duyệt ở 22 quốc gia. FDA Food and Drug Administration: Cơ quan quản lý Thuốc và Thực phẩm của Mỹ đã công nhận phytase là chất không gây độc hại Wodzinski và Ullah, 1996. 2.2.6.2. Trong sản xuất thực phẩm Chế biến thực phẩm cho con người cũng là một lĩnh vực ứng dụng của phytase. Ngũ cốc, hạt có dầu và các loại đậu với hàm lượng phytate cao là các loại nguyên liệu phổ biến trong chế biến thực phẩm. Phytate không tiêu hoá được trong ruột non ảnh hưởng tiêu cực đến sự hấp thu của kẽm, calcium, magnesium và sắt. Nó cũng làm giảm khả năng tiêu hóa của protein và ức chế các enzyme tiêu hóa. Do đó, việc bổ sung phytase vào nguyên liệu trước khi chế biến có ý nghĩa lớn Kerovuo, 2000. Anno et al. 1985 đã loại phytate từ sữa đậu nành bằng cách sử dụng phytase từ lúa mì. Bổ sung phytase của A. niger vào bột mì để tăng hấp thu sắt ở người Sandberg et al., 1996, làm bánh mì giàu sắt, phosphorus, protein dễ tiêu vì bánh mì bán ngoài thị Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học 10 trường chứa từ 0,29-1,05 ww phytic acid. Phytase đã được ứng dụng nhiều, một trong số đó có thể kể đến là Tempeh, thực phẩm phổ biến ở Indonesia. Đây là sản phẩm đậu nành lên men từ nấm mốc Rhizopus oligosporus. Nấm này có tiết phytase và làm tăng mùi, hàm lượng vitamin và khả năng tiêu hóa của đậu nành Han và Lei, 1999. 2.2.6.3. Trong công nghiệp bột giấy và giấy Phytic acid là thành phần quan trọng của thực vật. Do đó góp phần làm tăng ô nhiễm phosphorus cho môi trường. Các phytase chịu nhiệt được xem là một tác nhân sinh học dùng để phân hủy phytic acid trong quá trình chế biến bột giấy và giấy giúp tránh được việc tạo các sản phẩm phụ độc hại, có khả năng gây ung thư. Đây là một biện pháp thân thiện môi trường và sẽ hỗ trợ cho việc phát triển công nghệ sạch Liu et al., 1998. 2.2.6.4. Trong trồng trọt Phytase được dùng để cải thiện chất lượng đất, giúp gia tăng độ phì của đất trồng vì có những nơi phytic acid và các dẫn xuất của nó chiếm đến 50 tổng lượng phosphorus hữu cơ trong đất. Việc bổ sung phytase vào đất làm sản sinh phosphorus giúp cây tăng trưởng nhanh hơn và giảm chi phí dùng phân bón cho nhà nông Vohra và Satyanarayana, 2003. Findenegg và Nelemans 1993 nghiên cứu phytase trên hàm lượng phosphorus dễ tiêu trong đất trồng bắp, kết quả cho thấy cây bắp phát triển tương quan thuận với hàm lượng phytate được phân giải khi phytase được bổ sun
g vào đất. Idriss et al. 2002 nhận thấy phytase tiết ra từ vi khuẩn B. amyloliquefaciens FZB45 kích thích sự phát triển của cây bắp con được trồng trong hệ thống vô trùng có chứa phytate. Kết quả này chứng minh phytase được tổng hợp từ vi sinh vật đất đóng góp một cách có ý nghĩa đến sự biến dưỡng phosphorus trong cây. 2.2.6.5. Trong sản xuất myo-inositol phosphate Các dẫn xuất myo-inositol phosphate dùng trong sản xuất inositol phosphate và phospholipid cần cho quá trình vận chuyển các tín hiệu qua màng tế bào và vận chuyển calcium từ các nguồn dự trữ nội bào Billington, 1993. Hơn nữa, inositol triphosphate còn dùng để ngăn ngừa hoặc giảm nhẹ một số bệnh viêm nhiễm như viêm khớp và các bệnh đường hô hấp như hen suyễn Siren et al., 1992. Việc sử dụng inositol triphosphate là thuốc giảm đau cũng đã được đề xuất Siren, 1995. Đáng chú ý, các este của inositol triphosphate có tác dụng ức chế đáng kể đối với nhiễm trùng Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công 1.985 1.960 1.975 1.973 0.320 2.132 Sucrose 1.554 1.929 1.927 1.940 1.932 0.392 2.614 2.710 1.565 1.978 1.957 1.961 1.965 0.415 2.769 1.536 1.944 1.923 1.933 1.933 0.412 2.748 1 Glucose 1.519 2.014 1.968 2.037 2.006 0.506 3.370 3.523 1.504 2.055 1.993 2.046 2.031 0.547 3.647 1.519 2.078 2.019 2.001 2.033 0.533 3.552 Fructose 1.553 2.114 2.046 2.023 2.061 0.527 3.513 3.642 1.490 2.035 1.960 2.072 2.022 0.552 3.681 1.499 2.028 2.043 2.045 2.039 0.560 3.732 Maltose 1.593 2.068 2.055 1.968 2.030 0.454 3.024 3.341 1.648 2.165 2.185 2.127 2.159 0.530 3.534 1.633 2.085 2.180 2.137 2.134 0.520 3.465 Sucrose 1.569 2.180 2.163 1.908 2.084 0.534 3.559 3.543 1.519 2.097 2.000 2.089 2.062 0.563 3.755 1.495 1.968 1.975 1.980 1.974 0.497 3.315 1.5 Glucose 1.611 2.018 2.080 2.037 2.045 0.450 3.001 2.984 1.605 2.031 2.018 2.055 2.035 0.446 2.971 1.682 2.171 2.046 2.122 2.113 0.447 2.981 Fructose 1.679 2.023 2.027 2.015 2.022 0.355 2.370 2.407 1.675 2.048 2.038 2.028 2.038 0.377 2.510 1.669 1.982 2.048 1.992 2.007 0.351 2.340 Maltose 1.548 2.068 2.072 2.040 2.060 0.531 3.541 3.558 1.532 2.072 2.042 2.023 2.046 0.533 3.552 1.515 2.055 2.043 2.000 2.033 0.537 3.580 Sucrose 1.559 1.923 1.968 2.043 1.978 0.435 2.898 3.009 1.557 1.985 1.975 1.992 1.984 0.443 2.953 1.549 1.985 2.035 2.005 2.008 0.476 3.177 Đề cương Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 34- 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Bảng 17. Hàm lợng protein trong dịch trích enzyme thô của A. fumigatus theo các nguồn và hàm lợng carbon bổ sung Hàm lượng carbon Nguồn carbon OD Hàm lượng protein mgmL Trung bình L1 L2 L3 Trung bình 0 Không carbon 0.677 0.716 0.709 0.701 0.912 0.920 0.732 0.725 0.701 0.719 0.937 0.733 0.705 0.662 0.700 0.911 0.5 Glucose 0.759 0.719 0.791 0.756 0.987 0.968 0.742 0.708 0.703 0.718 0.935 0.748 0.752 0.756 0.752 0.982 Fructose 0.742 0.756 0.772 0.757 0.988 0.983 0.761 0.741 0.755 0.752 0.982 0.762 0.736 0.755 0.751 0.980 Maltose 0.649 0.612 0.653 0.638 0.826 0.827 0.656 0.631 0.642 0.643 0.833 0.623 0.636 0.648 0.636 0.823 Sucrose 0.724 0.717 0.705 0.715 0.932 0.934 0.722 0.737 0.727 0.729 0.950 0.713 0.704 0.704 0.707 0.920 1 Glucose 0.726 0.725 0.722 0.724 0.944 0.943 0.727 0.710 0.716 0.718 0.935 0.738 0.731 0.721 0.730 0.952 Fructose 0.684 0.674 0.683 0.680 0.884 0.883 0.672 0.678 0.682 0.677 0.880 0.684 0.674 0.687 0.682 0.886 Maltose 0.551 0.568 0.570 0.563 0.724 0.712 0.546 0.539 0.535 0.540 0.692 0.565 0.555 0.561 0.560 0.720 Sucrose 0.586 0.574 0.595 0.585 0.754 0.732 0.565 0.559 0.556 0.560 0.720 0.558 0.569 0.562 0.563 0.724 1.5 Glucose 0.682 0.671 0.682 0.678 0.881 0.890 0.682 0.683 0.691 0.685 0.891 0.696 0.685 0.695 0.692 0.900 Fructose 0.664 0.653 0.667 0.661 0.858 0.842 0.659 0.661 0.616 0.645 0.836 0.650 0.621 0.658 0.643 0.833 Maltose 0.720 0.719 0.739 0.726 0.946 0.937 0.730 0.723 0.723 0.725 0.945 0.711 0.700 0.712 0.708 0.921 Sucrose 0.613 0.635 0.623 0.624 0.807 0.821 0.636 0.639 0.645 0.640 0.829 0.628 0.647 0.644 0.640 0.828

Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn phân hủy keratin chịu nhiệt ở tỉnh Đồng Tháp

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN PHÂN HỦY KERATIN CHỊU NHIỆT Ở TỈNH ĐỒNG THÁP CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS. BÙI THỊ MINH DIỆU PHẠM MINH TRIẾT MSSV:3082639 LỚP:CNSH TT K34 Cần Thơ, Tháng 052013 Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ký tên ký tên TS. Bùi Thị Minh Diệu Phạm Minh Triết DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ký tên Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học LỜI CẢM TẠ Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến: Ban giám đốc Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học, trường Đại học Cần Thơ đã tạo điều kiện thuận lợi cho em trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn. TS. Bùi Thị Minh Diệu đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Em cũng xin gửi lời cảm ơn đến tập thể các thầy cô thuộc Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học, đã tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho em trong suốt quá trình học tập tại trường Đại Học Cần Thơ. Tập thể cán bộ và sinh viên phòng thí nghiệm Sinh học phân tử đã giúp đỡ tận tình và tạo điều kiện về các trang thiết bị cần thiết, cũng như chia sẽ kinh nghiệm cho em hoàn thành tốt luận văn. Gia đình đã làm điểm tựa vững chắc, bạn bè đã luôn giúp đỡ và động viên em để có thể hoàn thành tốt luận văn. Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học i TÓM LƯỢC Lông gia súc gia cầm được thải ra môi trường từ ngành chăn nuôi chưa qua xử lý đang là thách thức lớn đối với con người. Sử dụng vi khuẩn để xử lý nguồn chất thải chứa keratin này đã chứng minh được nhiều tiềm năng và ưu thế trong đời sống: chế biến thức ăn gia súc, gia cầm, sản xuất phân bón với giá thành thấp, thân thiện với môi trường Một vấn đề tồn tại là nhiệt độ ở các hố chôn nguồn chất thải này có thể tăng cao và làm ức chế hoạt động phân hủy của các dòng vi khuẩn thông thường. Vì vậy, đề tài được tiến hành nhằm phân lập và chọn ra những dòng vi khuẩn chịu nhiệt có khả năng phân hủy mạnh chất thải chứa keratin. Tổng cộng 18 dòng vi khuẩn hiếu khí chịu nhiệt đã được phân lập từ năm mẫu đất và hai mẫu nước trên môi trường có bổ sung bột lông gia cầm. 18 dòng vi khuẩn đều có khả năng phát triển và phân hủy keratin ở 45 o C 10 dòng có khả năng phát triển ở 50 o C và hai dòng có khả năng tồn tại ở 55 o C. Tất cả các dòng vi khuẩn phân lập được đều biểu hiện hoạt tính protease khi tạo vòng phân hủy trên môi trường sữa sau 24 giờ ủ ở các nhiệt độ khảo sát với đường kính phân hủy biến thiên từ 4,7mm đến 10,3mm. Chúng cũng thể hiện khả năng phân hủy bột lông gia cầm với các tỉ lệ khác nhau trong khoảng từ 14,59 đến 37,76Casarin, P. Heeb and A. Brandelli. 2007. Keratinolytic proteases of Bacillus species isolated from the Amazon basin showing remarkable de-hairing activity. World Journal of Microbiology and Biotecnology, 23: 375-382. Gousterova, A., D. Braikova, I. Goshev, P. Christov, K. Tishinov, V. E. Tonkova, T. Haertle and P. Nedkov. 2005. Degradation of keratin and collagen containing wastes by newly isolated thermoactinomycetes or by alkaline hydrolysis. Lett Appl Microbiol, 40: 335-340. Gradisar, H., S. Kern and J. Friedrich. 2000. Keratinase of Doratomyces microsporus. Applied Microbiology and Biotechnology, 53: 196-200. Grzywnowicz, G., J. Lobarzewski, K. Wawrzkiewicz and T. Wolski. 1989. Comparative characterization of proteolytic enzymes from Trichophyton gallinae and Trichophyton verrucosum. Journal of Medical and Veterinary Mycology, 27: 319-328. Gupta, R. and P. Ramnani. 2006. Microbial keratinases and their prospective applications: an overview. Appl Microbiol Biotechnol, 70:2133. Gupta, R., Q.K. Beg and P. Lorenz. 2002. Bacterial alkaline proteases: molecular approaches and industrial applications. Appl Microbiol Biotechnol, 59:1532. Gushterova, A., E. Vasilev, E. Dimova, P. Nedkov, and T. Haertlé. 2005. Keratinase production by newly isolated Antarctic Actinomycete strains. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 21: 831-834. Joshi, S.G., M.M. Tejashwini, N. Revati, R. Sridevi and D. Roma. 2007. Isolation, identification and characterization of a feather degrading bacterium. International Journal of Poultry Science, 6 9: 689-693. Jurasek, L., M.R. Carpenter, L.B. Smillie, A. Getler, S. Levis and L.H. Ericson. 1974. Amino acid sequence of Streptomyces griseus protease B, a major component of pronase. Biochemical and Biophysical Research Communications, 61:1095-1100. Kim, J.M., W.J. Lim and H.J. Suh. 2001. Feather-degrading Bacillus species from poultry waste. Process Biochemistry, 37: 287-291. Kumar, A.G., S. Swarnalatha, S. Gayathri, N. Nagesh and G. Sekaran. 2008. Characterization of an alkaline active-thiol forming extracellular serine keratinase by the newly isolated Bacillus pumilus. J Appl Microbiol, 104: 411-419. Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học 38 Kushwaha, R.K.S. 1983. The in vitro degradation of peacock feathers by some fungi. Mykosen, 26:324-326. Lee, G.G., P.R. Ferket and J.C.H. Shih. 1991. Improvement of feather digestibility by bacterial keratinase as a feed additive. FASEB J, 59:1312. Lin, X., C.G. Lee, E.S. Casale and J.C.H. Shih. 1992. Purification and Characterization of a keratinase from a Feather-Degrading Bacillus licheniformis Strain. Applied and environmental microbiology, 5810: 3271-3275. Lin, X., D.W. Kelemen, E.S. Miller and J.C.H. Shih. 1995. Nucleotide sequence and expression of kerA, the gene ncoding a keratinolytic protease of Bacillus licheniformis PWD-1. Appl. Environ. Microbiol., 61: 1469-1474. Lucas, F.S., O. Broennimann, I. Febbraro and P. Heeb. 2003. High diversity among feather-degrading bacteria from a dry meadow soil. Microbial Ecology, 45: 282- 290. Manczinger, L., M. Rozs, C.S. Vágvlgyi and F. Kevei. 2003. Isolation and characterization of a new keratinolytic Bacillus licheniformis strain. World J Microbiol Biotechnol, 19: 35-39. Mazotto, A.M., R.R.C. Rosalie, M.L.C. Sabrina, F.L. Marcos, C. Sonia, P.S. Edilma and B.V. Alane. 2011. Keratinase production by three Bacillus spp. using feather meal and whole feather as substrate in a submerged fermentation. Enzyme Research, doi:10.40612011523780. Mitsuiki, S., M. Ichikawa, T. Oka, M. Sakai, Y. Moriyama and Y. Sameshima. 2004. Molecular characterization of a keratinolytic enzyme from an alkaliphil
ic Nocardiopsis sp. TOA-1. Enzyme and Microbial Technology, 34: 482489. Nam, G. W., D.W. Lee, H. S. Lee, N.J. Lee, B.J. Kim and E.A. Choe. 2002. Native feather degradation by Fervidobacterium islandicum AW-1, a newly isolating keratinase-producing t Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học ANOVA Table for Phan huy gia cam 50C by Dong vi khuan Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2186.79 8 273.349 30.95 0.0000 Within groups 158.976 18 8.83201 Total Corr. 2345.77 26 Multiple Range Tests for Phan huy gia cam 50C by Dong vi khuan Method: 95.0 percent LSD Dong vi khuan Count Mean Homogeneous Groups con 3 2.29333 x v14 3 26.4433 x v12 3 28.2767 x v15 3 28.8133 x v16 3 28.96 x v13 3 29.8167 x v10 3 30.6667 xx v11 3 30.6767 xx v1 3 35.6467 x 20. Bảng 31: Thống kê khả năng phân hủy bột lông gia cầm của các dòng vi khuẩn sau một tuần lắc ủ ở 55 o C ANOVA Table for Phan huy gia cam 55C by Dong vi khuan Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1238.38 2 619.189 139.72 0.0000 Within groups 26.5907 6 4.43179 Total Corr. 1264.97 8 Multiple Range Tests for Phan huy gia cam 55C by Dong vi khuan Method: 95.0 percent LSD Dong vi khuan Count Mean Homogeneous Groups con3 3 2.38333 x v18 3 26.75 x v17 3 27.7533 x Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học 21. Bảng 32: Thống kê khả năng phân hủy bột lông dê của các dòng vi khuẩn sau một tuần lắc ủ ở 45 o C ANOVA Table for Phan huy long de 45C by Dong vi khuan Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3365.35 8 420.669 46.02 0.0000 Within groups 164.523 18 9.14016 Total Corr. 3529.88 26 Multiple Range Tests for Phan huy long de 45C by Dong vi khuan Method: 95.0 percent LSD Dong vi khuan Count Mean Homogeneous Groups con 3 2.37667 x v3 3 25.1233 x v5 3 29.91 xx v7 3 30.3233 x v6 3 31.15 x v4 3 34.5 xx v8 3 36.95 xx v2 3 40.8533 xx v9 3 42.1833 x 22. Bảng 33: Thống kê khả năng phân hủy bột lông dê của các dòng vi khuẩn sau một tuần lắc ủ ở 50 o C ANOVA Table for Phan huy long de 50C by Dong vi khuan Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2927.13 8 365.891 13.51 0.0000 Within groups 487.451 18 27.0806 Total Corr. 3414.58 26 Multiple Range Tests for Phan huy long de 50C by Dong vi khuan Method: 95.0 percent LSD Dong vi khuan Count Mean Homogeneous Groups con2 3 2.18 x v15 3 28.1867 x v11 3 30.65 xx v12 3 31.0733 xx v10 3 31.6467 xxx v16 3 33.53 xxx v13 3 34.2867 xxx v14 3 37.3233 xx v1 3 40.4767 x Luận văn Tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Tiên Tiến Viện NCPT Công nghệ Sinh học 23. Bảng 34: Thống kê khả năng phân hủy bột lông dê của các dòng vi khuẩn sau một tuần lắc ủ ở 55 o C ANOVA Table for Phan huy long de 55C by Dong vi khuan Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1537.37 2 768.686 151.25 0.0000 Within groups 30.4931 6 5.08219 Total Corr. 1567.86 8 Multiple Range Tests for Phan huy long de 55C by Dong vi khuan Method: 95.0 percent LSD Dong vi khuan Count Mean Homogeneous Groups con3 3 2.68333 x v17 3 30.35 x v18 3 30.4667 x

Khảo sát sự phân ly của tổ hợp lai đậu nành hoang (Glycine soja) và đậu nành trồng (Glycine max) dựa vào hình thái, nông học và dấu phân tử SSR

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT SỰ PHÂN LY CỦA TỔ HỢP LAI ĐẬU NÀNH HOANG Glycine soja VÀ ĐẬU NÀNH TRỒNG Glycine max DỰA VÀO HÌNH THÁI, NÔNG HỌC VÀ DẤU PHÂN TỬ SSR CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS. TRƯƠNG TRỌNG NGÔN NGUYỄN QUANG ĐẠT ThS. NGUYỄN TRÍ YẾN CHI MSSV: 3082585 LỚP: CNSHTT K34 Cần Thơ, Tháng 42013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Ts. Trương Trọng Ngôn Nguyễn Quang Đạt DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn: Tiến sĩ Trương Trọng Ngôn là người thầy luôn có lòng vị tha, người đã trực tiếp và tận tình hướng dẫn về kiến thức chuyên môn, động viên, giúp đỡ, tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Mẹ và bà ngoại luôn ở bên tôi trong lúc khó khăn, luôn động viên và giúp đỡ tôi trong cuộc sống. Thạc sĩ Nguyễn Trí Yến Chi là người luôn nhiệt tình hướng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến quý báu để tôi hoàn thành được đề tài. Tập thể cán bộ Phòng Sinh học phân tử thực vật đã luôn tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong lúc tiến hành thí nghiệm. Tập thể lớp Công nghệ sinh học tiên tiến khóa 34 đã luôn động viên và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện đề tài. Người thực hiện NGUYỄN QUANG ĐẠT Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học i TÓM LƯỢC Quần thể F 2 của tổ hợp lai giữa đậu nành hoang và đậu nành trồng được khảo sát để đánh giá sự phân ly dựa vào bảy đặc tính hình thái, 10 đặc tính nông học và sáu dấu SSR. Tổ hợp lai được tạo ra trước đó bằng phép lai giữa cây bố Soja 182 Glycine soja Sieb. et Zucc. và cây mẹ Xanh Hà Bắc Glycine max L. Merr.. Kết quả phân tích cho thấy màu trục hạ diệp, màu hoa và dạng lá chét của các cá thể F 2 giống với bố mẹ. Màu vỏ hạt không phân ly theo tỉ lệ Mendel. Màu vỏ trái chín phân ly theo tỉ lệ 1 : 2 : 1. Màu tể phân ly theo tỉ lệ 3 : 1. Ba đặc tính nông học gồm chiều cao dứt trổ, số long trên thân chính và năng suất có khả năng biến dị cao ở quần thể F 2 . Về kiểu gen, cả sáu dấu SSR đều phân ly theo tỉ lệ Mendel 1 : 2 : 1, và không có sự phân ly lệch hướng nào được phát hiện. Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học ii MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT …………………………………………………………………………………………… LỜI CẢM TẠ …………………………………………………………………………………………………… TÓM LƯỢC ……………………………………………………………………………………………………. i MỤC LỤC …………………………………………………………………………….. hoang …………………………………………………………………. 4 2.3. Biến dị di truyền……………………………………………………………………………………….. 4 2.4. Hệ số di truyền …………………………………………………………………………………………. 5 2.5. Phương pháp nghiên cứu biến dị di truyền………………………………………………… 5 2.6. Di truyền tính trạng chất lượng ở đậu nành ………………………………………………. 6 2.7. Di truyền tính trạng số lượng ở đậu nành………………………………………………….. 7 2.8. Một số quan điểm về chọn tạo giống đậu nành…………………………………………… 7 2.9. Những nghiên cứu trước đây về biến dị di truyền trong các tổ hợp lai giữa G. soja và G. max…………………………………………………………………………………………………. 9 2.10. Kỹ thuật dấu phân tử SSR …………………………………………………………………….. 10 2.10.1. DNA vi vệ tinh microsatellite DNA …………………………………………………… 10 2.10.2. Dấu phân tử SSR SSR marker………………………………………………………….. 13 CHƯƠNG 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………… 15 3.1. Phương tiện…………………………………………………………………………………………….. 15 3.1.1. Thời gian và địa điểm …………………………………………………………………………… 15 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học iii 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu ………………………………………………………………………………. 15 3.1.3. Dụng cụ và thiết bị……………………………………………………………………………….. 15 3.1.4. Hóa chất ………………………………………………………………………………………………. 15 3.1.5. Nông dược……………………………………………………………………………………………. 16 3.2. Phương pháp nghiên cứu ………………………………………………………………………… 16 3.2.1. Bố trí thí nghiệm ………………………………………………………………………………….. 16 3.2.2. Kỹ thuật canh tác…………………………………………………………………………………. 16 3.2.3. Ghi nhận các chỉ tiêu kiểu hình …………………………………………………………….. 17 3.2.4. Phân tích kiểu gen bằng dấu SSR …………………………………………………………. 19 3.2.4.1. Ly trích DNA…………………………………………………………………………………….. 19 3.2.4.2. Kiểm tra độ tinh sạch của DNA………………………………………………………….. 20 3.2.4.3. Khuếch đại các locus SSR ………………………………………………………………….. 21 3.2.5. Phân tích di truyền dựa trên kiểu hình và dấu SSR……………………………….. 24 3.2.5.1. Phân tích các đặc tính hình thái …………………………………………………………. 24 3.2.5.2. Phân tích các chỉ tiêu sinh trưởng………………………………………………………. 24 3.2.5.3. Phân tích các chỉ tiêu nông học, năng suất………………………………………….. 24 3.2.5.4. Phân t
ích hệ số di truyền trong quần thể F 2 ………………………………………… 24 3.2.5.5. Phân tích kiểu phân ly của các locus SSR …………………………………………… 24 CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………………………………. 26 4.1. Kết quả tổng quát …………………………………………………………………….. f MS F P-value F crit Giữa nhóm 4518,25 2 2259,125 1,456562023 0,250770759 3,354130829 Trong nhóm 41876,95 27 1550,998148 Tổng 46395,2 29 Bảng 14. Bảng phân tích phương sai trọng lượng 100 hạt Nguồn biến động SS df MS F P-value F crit Giữa nhóm 0,761305 2 0,3806525 0,703359869 0,503762862 3,354130829 Trong nhóm 14,612175 27 0,5411916 Tổng 15,37348 29 Bảng 15. Bảng phân tích phương sai năng suất hạt gcây Nguồn biến động SS df MS F P-value F crit Giữa nhóm 170,532511 2 85,266255 2,295060269 0,12007939 3,354130829 Trong nhóm 1003,10607 27 37,152076 Tổng 1173,63858 29 Bảng 16. Bảng phân tích phương sai chiều cao cây dứt trổ Nguồn biến động SS df MS F P-value F crit Giữa nhóm 32586,766 2 16293,3833 9,5555723 0,0007278 3,354130829 Trong nhóm 46038,2 27 1705,11851 Tổng 78624,966 29 Bảng 17. Bảng phân tích phương sai chiều cao cây lúc trổ Nguồn biến động SS df MS F P-value F crit Giữa nhóm 660,427777 2 330,21388 1,01552902 0,37563162 3,354130829 Trong nhóm 8779,43888 27 325,16440 Tổng 9439,86666 29 Bảng 18. Bảng phân tích phương sai chiều cao đóng trái Nguồn biến động SS df MS F P-value F crit Giữa nhóm 2.593402778 2 1.296701389 0.20424235 0.81651274 3,354130829 Trong nhóm 171.4185972 27 6.348836934 Tổng 174.012 29 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Hình 16. Phổ điện di tại locus Satt173 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 Hình 17. Phổ điện di tại locus Satt197 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 210bp 197bp 210bp 190bp Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Hình 18. Phổ điện di tại locus Satt231 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 Hình 19. Phổ điện di tại locus Satt243 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 237bp 210bp 210bp 220bp Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Hình 20. Phổ điện di tại locus Satt373 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 Hình 21. Phổ điện di tại locus Satt495 M: thang chuẩn P1: cây mẹ Xanh Hà Bắc P2: cây bố Soja 182 F1: cây F1 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 1 13: cây F2 của phép lai Xanh Hà Bắc x Soja 182 245bp 255bp 290bp 254bp Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Hình 22. Dạng thân cây bố, mẹ, F 1 và một cá thể F 2 422013 F2: Xanh Hà Bắc x Soja 182

Khảo sát ảnh hưởng của pH, chu kỳ sáng tối và màu sắc ánh sáng đến khả năng tổng hợp chlorophyll và carotenoid ở tảo Spirulina sp.

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO T ẠO TRƯỜNG Đ ẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN T ỐT NGHIỆP ĐẠ HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ẢNH HƯ ỞNG CỦA pH, CHU KỲ SÁNG TỐI VÀ MÀU SẮC ÁNH SÁNG ĐẾN KHẢ NĂNG T ỔNG HỢP CHLOROPHYLL VÀ CAROTENOID Ở TẢO SPIRULINA SP. CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS.TS. NGUYỄN HỮU HIỆP NGUYỄN THỊ HUỲNH NHƯ MSSV: 3082618 LỚP: CNSHTT K34 Cần Thơ, tháng 052013 Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN S NH V ÊN THỰC H ỆN PGS.TS NGUYỄN HỮU H ỆP NGUYỄN THỊ HUỲNH NHƯ DUYỆT CỦA HỘ ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘ Đ ỒNG Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học CẢ TẠ Trước tiên, xin gửi lời biết ơn chân thành nh ất đ ến cha mẹ và mọi ngư ời trong gia đình đã có công sinh thành và nuôi d ạy con đ ến ngày hôm nay. Xin cảm ơn t ất cả các quý thầy cô thuộc Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học đã truy ền đ ạt cho tôi nhiều kiến thức bổ ích trong quá trình theo học tại trư ờng. Xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu s ắc đ ến thầy c vấn học t PGs.Ts. Nguyễn Hữu Hiệ đã t n tình hư ớng dẫn, gợi ý và cho những lời khuyên hết sức bổ ích trong việc nghiên cứu và hoàn thành lu n văn này. Cảm ơn các anh ch ị tại Phòng Vi sinh v t, Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ Sinh học, Trư ờng Đ ại Học Cần Thơ đã h ết lòng giú đ ỡ tôi trong su t quá trình tiến hành thí nghiệm. Xin cảm ơn t ất cả các bạn Lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến K34 cùng các em sinh viên K35, K36 và mọi thành viên hòng 6B11 đã luôn c ổ vũ, đ ộng viên và giú đ ỡ tôi trong su t thời gian qua. Xin kính chúc ba mẹ, quý thầy cô, các anh chị dồi dào sức khỏe Chúc tất cả các bạn Lớp Công nghệ Sinh học tiên tiến K34 báo cáo lu n văn thành công t t đ ẹp. Tp. Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 Ng n Th H nh Nh Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học T LƯỢC Spirulina sp. à à t o à , ạng n h nh Đ y à m t à v t g á tr nh ư ng r t , g à pr t n , r hy r t , v t m n và á tố chlorophyll, carotenoid. D ngh ên ứu và ứng dụng t o Spirulina sp. ngày càng ư c các nhà khoa họ q n t m, ặc biệt là các yếu tố nh hư ởng ến kh năng nh ra các loại s c tố. Đ tà ư th h ện nh m h át nh hưởng pH , ánh áng và h h ế áng ên h năng phát tr n và t ng h p tố ở t Spirulina p ết q á th ngh ệm h th y ở pH , ánh áng tr ng và thờ g n h ế áng 242 g ờ à ện tốt h phát tr n nh hố ng như t h y h r phy , ch r phy và r t n ở t . pH 9 sinh hố và r t n oid th ư nh t ở ngà y 0,1 g 0m và 1,43 gmL , h r phy h r phy th ư nh t ở ngày 12 2, 2 g m và 3,3 g m Dư tá ng ánh áng t phát tr n r t hậm ở ánh áng mà xanh m , gần như h ng phát tr n ở ánh áng . Kh n t tr ng m trường h ế áng ên tụ 2 2 g ờ , nh hố hơn 1,0 ần, h r phy hơn 2,3 ần, h r phy hơn 1,2 ần , carotenoid hơn 1, ần v á ngh ệm thứ n tr ng m trường h ế áng 12 2 gng sinh kh i S. platensis rất cao, đ ặc biệt là carotenoid, chlorophyll, phycocyanin. – Chlorophyll có cấu trúc gần gi ng hemoglobin, chỉ khác là nhóm kim loại của nó là Mg ở dạng ion nên có màu xanh thay vì Fe trong hemoglo in màu đ ỏ. Trong sinh kh i S. platensis có chứa khoảng 1,15 chlorophyll, chiếm tỉ lệ cao nhất so với các loại th c phẩm t nhiên khác. – Carotenoid là sắc t màu vàng cam trong sinh kh i Spirulina. Các carotenoid chính ở Spirulina sp. là oscillaxanthin, mycoxanthophyll, zeaxanthin, hydro- echinenon, – carotene, – crytoxanthin, echinenon. Các lipid chủ yếu của Spirulina sp. là mono di – galactosyldiglycerrid và hos hatidyglycerol Đ ặng Đình im và Đặng Hoàng Phư ớc Hiền, 1999. Mỗi kilogram Spirulina khô chứa từ 700 – 1 mg – carotene và khoảng 100 mg cryptoxanthin, hai loại carotenoid này đư ợc chuyển hóa thành vitamin A trong cơ th ể người. Lipid: Hàm lư ợng lipid khoảng 5 7 trọng lượng khô Spirulina. lượng lipid tổng chứa chủ yếu là paraffin, các sắc t , các sterol. Các acid béo: Các acid béo chiếm 60 70 lipid. Nhu cầu acid béo thiết yếu từ 1- 2 đ i với ngư ời trư ởng thành và khoảng 3 với trẻ em. hư đã i ết, lư ợng chất béo thiết yếu đưa vào cơ th ể có tác đ ộng lên hệ miễn dịch, bao gồm cả miễn dịch thể dịch và tế bào. Acid béo thiết yếu đư ợc chia làm hai nhóm omega 3 và omega 6. Carbohydrate: Nhìn chung, carbohydrate chiếm 15 – 25 trọng lư ợng khô Spirulina sp. Những carbohydrate đơn gi ản như glucose, fructose và sucrose ch ỉ có Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 9 Viện NCPT Công nghệ Sinh học mặt ở lượng rất nhỏ. Các olyol như glycerol, mannitol và sor itol cũng đư ợc tìm thấy trong Spirulina sp. Vitamin và khoáng chất: chứa nhiều loại vitamin như vitamin A, B1, B2, B3, đ ặc biệt là vitamin B12 và tiền vitamin A. Spirulina s . cũng giàu m ột s khoáng chất như sắt, hos ho, magie, calci Pandey et al., 2010. 2.2.5. Ứng dụng Trong Spirulina platensis hàm lư ợng protein rất cao với đ ầy đ ủ các acid amin thiết yếu, giàu caroten, các vitamin nhóm B. S có mặt của nhiều hoạt chất ch ng oxy hóa như các s ắc t như carotenoid, hycocyanin, chloro hyll, hiến sinh kh i Spirulina platensis trở nên quý giá hơn. Spirulina được ứng dụng trong các lĩnh v c: dinh dư ỡng cho ngư ời, làm thức ăn cho đ ộng v t và các nguồn sản phẩm t nhiên hác Đ ặng Đình im và Đ ặng Hoàng Phước Hiền, 1999. Ngoài ra sắc t quang hợp phycobiliprotein trong tảo đư ợc sử dụng như ch ất màu th c phẩm có giá trị Becker., 2004, phát hiện và đánh d ấu các kháng thể trong nghiên cứu miễn dịch nhờ vào khả năng hát hu ỳnh quang của chúng www.proenzyme.comtechnicalpbvrwdata.htmlSPECIFICATION, 2005. Spirulina còn là nguồn cung cấ lý tư ởng cho cơ th ể chúng ta các Vitamin thuộc nhóm B mà cơ th ể người luôn có s thiếu hụt chúng các Vitamin nhóm B hòa tan trong nư ớc, do v y chúng luôn dễ dàng và nhanh chóng bị đào th ải khỏi cơ th ể. Các Vitamin nhóm B rất cần thiết cho hoạt đ ộng của các cơ, h ệ tiêu hóa, rất t t cho mắt, gan, da, vòm miệng, tóc, giú đi ều hòa hệ thần inh, đi ều chỉnh lượng cholesterol trong máu. Thành phần dinh dư ỡng đa d ạng và an toàn khi dùng làm th c phẩm nên sinh kh i Spirulina platensis được dùng làm làm thức ăn ổ dưỡng cho con ngư ời, cũng như ứng dụng trong nhiều lĩnh v c hác nhau n
hư y h ọc, mỹ phẩm, Thêm vào đó nhi ều gi ng loài tảo trong đó có t ảo Spirulina cũng đư ợc ứng dụng nhiều trong việc xử lý nư ớc thải, trong nuôi trồng thủy sản. Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 10 Viện NCPT Công nghệ Sinh học 2.3. Giới thiệu về chlorophyll Việc chiếc tách các sắc t từ lá xanh của th c v t đã và đang đư ợc các nhà khoa học rất quan tâm, cách đây hơn 1 năm các nhà hóa h ọc đã tách đư ợc chất màu xanh từ lá và gọi chúng là chlorophyll. Chlorophyll là sắc t quang hợp chỉ có ở sinh v t t dưỡng hoặc th c v t hù du như t ảo… Lượng chlorophyll có trong tế bào phụ thuộc vào lư ợng sinh kh i Norbert Wasmund et al., 2006. Từ chloro hyl 4 0.323908 82 8 0.0884 0.01037 0.09059 0.01121 9.8 0.129 0.65044 0.94628 0.473392 83 8 0.0808 0.0282 0.0453 0.022892 9.71 0.1286 0.64656 0.64432 0.541306 91 9 0.0837 0.01599 0.05033 0.038385 9.82 0.1053 0.76364 2.11388 0.447839 92 9 0.0702 0.02539 0.06543 0.018116 9.82 0.1164 0.6683 3.2915 0.411888 93 9 0.0731 0.0188 0.0302 0.038756 9.83 0.1209 0.84078 2.38566 0.657013 101 10 0.0748 0.01037 0.09059 0.015616 10.12 0.1318 1.06832 2.89904 0.207077 102 10 0.0882 0.02539 0.06543 0.026926 10.06 0.1238 1.23692 1.69124 0.599411 103 10 0.0914 0.0188 0.0302 0.034351 10.09 0.1502 0.99312 2.77824 0.263505 111 11 0.0783 0.01599 0.05033 0.03398 10.24 0.0962 0.43648 1.48976 0.438932 112 11 0.087 0.0188 0.0302 0.038756 10.23 0.1043 0.36128 1.36896 0.424876 113 11 0.0831 0.01318 0.07046 0.015987 10.29 0.1079 0.24112 1.57024 0.122936 ngày 8 ngày 12 ghiệm thức pH Chlorophyll a Chlorophyll b Carotenoid pH Chlorophyll a Chlorophyll b Carotenoid 81 10.01 0.126 2.1056 3.3824 1.204163 10.1 0.1076 1.78757 3.42409 0.601871 82 9.99 0.1328 2.08312 3.54344 1.18357 10.11 0.0922 2.04572 3.97624 0.75027 83 9.99 0.1244 2.1056 3.3824 0.99271 10.13 0.1251 2.1809 3.7498 0.950237 91 10 0.1353 2.61648 3.02016 1.644703 10.15 0.1408 3.2055 3.3957 0.613965 92 9.99 0.1691 2.3312 3.7448 1.387303 10.14 0.1184 2.4347 4.1575 1.788624 93 10 0.1621 2.24824 3.02008 1.262379 10.13 0.121 2.5193 4.0934 1.56846 101 10.1 0.1254 0.49 3.7444 0.49771 10.15 0.0623 0.8364 0.8507 0.981463 102 10.14 0.1561 1.3815 1.4799 1.310894 10.18 0.0702 0.7614 1.2231 1.041004 103 10.12 0.1276 0.94388 1.81196 1.270792 10.17 0.0866 0.72738 0.72486 1.322626 111 10.21 0.1254 0.68884 2.97948 0.034721 10.2 0.0407 0.75267 0.54369 0.691608 112 10.17 0.096 1.17296 1.48992 0.357765 10.2 0.0894 0.69336 0.22662 0.917023 113 10.14 0.1222 0.7338 2.6574 0.252118 10.19 0.0703 0.56661 0.39267 0.710615 Luận văn t ốt nghệp Đ ại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học ngày 16 ngày 20 ghiệm thức pH Chlorophyll a Chlorophyll b Caroten pH Chlorophyll a Chlorophyll b Caroten 81 10.08 0.1076 1.77536 3.22912 0.66101 10.1 0.0836 0.91792 2.65744 0.65489 82 10.07 0.0922 1.96112 3.54034 0.950579 10.07 0.0976 0.97412 2.25484 0.670448 83 10.06 0.1251 1.93583 3.02151 1.078807 10.06 0.0997 0.9028 2.436 0.429219 91 10.07 0.1408 2.06753 4.47951 1.235089 10.08 0.1248 1.7015 2.9797 0.777741 92 10.04 0.1184 2.9414 2.7535 1.073386 10.07 0.1301 1.51156 2.52672 0.794178 93 10.03 0.121 3.1387 2.824 0.930609 10.06 0.1141 1.66002 2.61734 0.812195 101 10.06 0.0623 0.69655 0.58535 0.617418 10.09 0.0714 0.37988 0.90596 0.31955 102 10.06 0.0702 0.66137 0.81179 0.436327 10.07 0.0823 0.81168 0.12096 0.338176 103 10.06 0.0866 0.60206 0.49472 0.503151 10.02 0.0605 0.43608 0.50336 0.415086 111 10.09 0.0407 0.70206 0.49472 0.388614 10.08 0.0444 0.7706 0.345 0.370045 112 10.1 0.0894 0.78898 0.67086 0.387399 10.08 0.0644 0.7049 0.2859 0.059742 113 10.07 0.0703 0.72735 0.31355 0.391958 10.08 0.0456 0.65509 0.33053 0.350144

Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn chịu nhiệt có khả năng phân hủy Toluene

Download/Tải xuống/Xem chi tiết

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN CHỊU NHIỆT CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY TOLUENE CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS. TS.NGUYỄN HỮU HIỆP VÕ NGỌC THẢO NGUYÊN MSSV:3082615 LỚP:CNSHTT K34 Cần Thơ, Tháng 052013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS. TS. Nguyễn Hữu Hiệp Võ Ngọc Thảo Nguyên DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ Qua quá trình thực hiện luận văn, em đã học hỏi được rất nhiều. Lần đầu tiên, em được trải nghiệm quá trình nghiên cứu khoa học thật sự và đầy thú vị. Cũng nhờ quá trình này, em càng hiểu và quý trọng những tình cảm, sự giúp đỡ của mọi người. Em xin gởi lời cám ơn chân thành đến mọi người. Đầu tiên, em xin chân thành cám ơn toàn thể các thầy cô thuộc Viện Nghiên cứu và Phát triển Công Nghệ Sinh Học đã mang đến cho em chân trời tri thức, giúp đỡ em hết mình trong quá trình học tập cũng như nghiên cứu của mình. Em xin gởi lời tri ân sâu sắc đến thầy Nguyễn Hữu Hiệp, người vừa là cố vấn học tập, đã quan tâm, giúp đỡ em trong suốt 05 năm đại học, vừa là thầy hướng dẫn tận tụy. Nhờ sự giúp đỡ tận tình của thầy mà em có thể hoàn thành luận văn này. Ngoài ra, em cũng xin chân thành cám ơn anh, chị và các bạn thuộc phòng thí nghiệm Vi Sinh Vật, phòng Sinh học Phân tử thực vật đã hỗ trợ em hết mình trong quá trình thực hiện luận văn. Cuối cùng, em xin gởi lời tri ân đến gia đình. Nơi về hạnh phúc và an lành cho em. Võ Ngọc Thảo Nguyên Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NCPT Công nghệ Sinh học TÓM LỢC Nền công nghiệp ngày càng phát triển giúp cuộc sống con người ngày càng tốt hơn. Tuy nhiên, công nghiệp hóa không đi liền với bảo vệ mội trường dẫn tới những ảnh hưởng tiêu cực lên Trái Đất cũng như sức khỏe con người. Nhiễm độc Toluene, một loại dung môi hữu cơ được sử dụng phổ biến ở ngành công nghiệp sơn và thuộc da, là vấn đề đang được các nhà nghiên cứu khoa học quan tâm. Mục tiêu của đề tài là phân lập và tuyển chọn những dòng vi khuẩn chịu nhiệt có khả năng phân hủy Toluene. Mẫu đất thu được tại 04 nguồn: mẫu dất gần Nhà máy thuộc da Tây Đô, Xí nghiệp nhựa Cần Thơ, hồ Xáng Thổi, ruộng lúa có nguy cơ nhiễm độc Toluene cao ở địa bàn thành phố Cần Thơ được tăng sinh khối vi khuẩn bằng cách ủ với Toluene ở nồng độ 1 và 10 ở 45 o C ở cả hai pha khí và pha lỏng và sử dụng môi trường MSB mineral salt basal để phân lập. Các dòng vi khuẩn có khả năng phát triển với Toluene là nguồn carbon duy nhất và khả năng tạo enzyme protease, cellulase, amylase và lipase được giải trình tự và chứng minh khả năng phân hủy bằng phương pháp đếm mật số phát triển với Toluene là nguồn carbon duy nhất ở các nồng độ 0, 1, 1,5, 2. Từ 04 nguồn đất đã phân lập được 09 dòng vi khuẩn. Hầu hết các dòng vi khuẩn đều có khả năng tổng hợp các enzyme. Ba dòng được tuyển chọn chính là T14, T38 và T50. Kết ẩn Gram âm trở nên hồng đỏ. Rửa lại bằng nước cất vô trùng cho đến khi giọt nước cuối cùng không còn màu của Fushin. Dùng giấy thấm chậm nhẹ hay hơ lửa cho khô nước. Quan sát mẫu dưới kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 400 lần và ghi nhận kết quả. Nếu mẫu vi khuẩn có màu tím xanh của Crystal violet là vi khuẩn Gram dương, có màu hồng đỏ của Fushin là vi khuẩn Gram âm. 3.2.4. Tuyển chọn các dòng vi khuẩn có khả năng phân hủy Toluene Các dòng vi khuẩn sau khi phân lập từ các mẫu khác nhau được nhân giống và cấy chuyển ra các ống thạch nghiêng. Tiến hành nuôi lắc từng dòng trên môi trường MSB lỏng chứa 0,01 yeast extract, ở 45 o C, tốc độ lắc 120 vòngphút với tỉ lệ 1 giống để tăng sinh vi khuẩn. Chủng vi khuẩn đã nuôi lắc vào môi trường MSB có chứa Toluene ở các nồng độ 0, 1, 1,5, 2. Đo sự thay đổi độ đục OD600 nm để xác định dòng vi khuẩn có khả năng phân hủy Toluene trong các ngày 0, 2, 4. 3.2.5. Khảo sát khả năng tạo một số enzyme Sau khi tuyển chọn các dòng vi khuẩn, tiếp tục tiến hành khảo sát hoạt tính của một số enzyme như: protease, cellulase, amylase và lipase. Khảo sát khả năng tạo enzyme protease – Môi trường: MSB agar có skim milk 2 – Cách tiến hành: Vi khuẩn nuôi trong môi trường LB lỏng qua đêm sau đó nhỏ 5l dung dịch vi khuẩn lên môi trường MSB agar có skim milk 2 và ủ ở 45 o C. Đo đường kính vùng sáng quanh khuẩn lạc sau 1, 2, 3 ngày để xác định khả năng tổng hợp enzyme protease của vi khuẩn. Khảo sát khả năng tạo enzyme lipase – Môi trường: MSB lỏng có bổ sung dầu ăn 2 – Cách tiến hành: chủng vi khuẩn vào môi trường MSB lỏng có bổ sung dầu ăn Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 20 Viện NCPT Công nghệ Sinh học 2 đặt trên máy lắc 120 vòngphút trong 2-3 ngày ở 45 o C. Đo OD600nm các ngày 0, 2 và 4 để xác định khả năng tăng sinh khối của vi khuẩn trong môi trường chứa 2 dầu ăn của vi khuẩn. Khảo sát khả năng tạo enzyme amylase – Môi trường: MSB agar có bổ sung tinh bột 2 – Cách tiến hành: Vi khuẩn nuôi trong môi trường LB lỏng qua đêm sau đó nhỏ 5l dung dịch vi khuẩn lên môi trường MSB agar có tinh bột 2. Sau 2 ngày ủ ở 45 o C cho dung dịch Iod phủ lên bề mặt thạch. Enzyme amylase do vi khuẩn tổng hợp sẽ thủy phân tinh bột trong môi trường, phần tinh bột không bị thủy phân tác dụng với dung dịch Iod tạo thành màu xanh đen. Khảo sát khả năng tạo enzyme cellulase – Môi trường: MSB agar có CMC 2 – Cách tiến hành: Vi khuẩn nuôi trong môi trường LB lỏng qua đêm sau đó nhỏ 5l dung dịch vi khuẩn lên môi trường MSB agar có CMC 2. Sau khi ủ vi khuẩn 2- 3 ngày phủ lên bề mặt agar dung dịch Iodine và đo đường kính vòng sáng xuất hiện quanh khuẩn lạc vi khuẩn. 3.2.6. Định danh vi khuẩn bằng kỹ thuật sinh học phân tử Căn cứ vào kết quả của thí nghiệm tuyển chọn vi khuẩn có khả năng phân hủy dung môi hữu cơ và các kiểm tra sinh hóa để chọn ra 03 dòng vi khuẩn có tiềm năng cao. 03 dòng vi khuẩn này sẽ được gởi giải trình tự tại phòng thí nghiệm sinh học phân tử của Viện Nghiên cứu và Phát triển Công nghệ sinh học, Đại học Cần Thơ. 3.2.7. Th
í nghiệm chứng minh khả năng phân hủy dung môi hữu cơ Thí nghiệm được tiến hành với 4 nghiệm thức bao gồm nghiệm thức đối chứng và ba nghiệm thức còn lại là ba nồng độ dung môi hữu cơ khác nhau, được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên 3 lần lặp lại. Chuẩn bị các nghiệm thức môi trường lỏng: – Pha môi trường MSB cho lần lượt vào các ống nghiệm, mỗi ống thể tích 5ml, đậy nắp sau đó đem khử trùng ở nồi khử trùng nhiệt ướt ở 121 o C trong 20 phút. Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 21 Viện NCPT Công nghệ Sinh học – Để nguội môi trường sau đó tiến hành chủng dòng vi khuẩn vào các ống nghiệm trong điều kiện vô trùng. Ở mỗi thí nghiệm, thể tích vi khuẩn được chủng vào các nghiệm thức cũng như các lần lặp lại là 500 l mật độ 2.10 2 CFUml – Dung môi hữu cơ được cho trực tiếp vào môi trường ở các nghiệm thức dưới dạng dung dịch lỏng theo những thể tích đã được mô tả ở bảng 4. – Các nghiệm thức s O 1985 ngày 10012013 http:aquaticpath.umd.eduappliedtoxorganics.pdf ngày 11012013 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết quả 1. Kết quả trả cứu BLAST của dòng T14 2. Kết quả tra cứu BLAST của dòng T38 3. Kết quả tra cứu BLAST của dòng T50 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Phụ lục 2: Kết quả 1. Bảng 13: Kết quả thí nghiệm tuyển chọn vi khuẩn có khả năng phân hủy Toluene OD 600nm Dòng Ngày 0 Ngày 2 Ngày 4 T3 0 0,1075 0,0616 0,0426 T3 1 0,0646 0,0623 0,0426 T3 1.5 0,0673 0,0563 0,044 T3 2 0,059 0,0606 0,0486 T4 0 0,1035 0,075 0,053 T4 1 0,0823 0,061 0,053 T4 1.5 0,0813 0,0656 0,059 T4 2 0,09 0,059 0,0526 T9 0 0,089 0,063 0,07 T9 1 0,064 0,048 0,0613 T9 1.5 0,0753 0,0613 0,058 T9 2 0,0913 0,0476 0,0673 T12 0 0,0793 0,0646 0,0613 T12 1 0,086 0,0646 0,0773 T12 1.5 0,0646 0,064 0,0613 T12 2 0,0593 0,0596 0,0746 T14 0 0,107 0,074 0,0623 T14 1 0,071 0,076 0,098 T14 1.5 0,076 0,088 0,115 T14 2 0,0796 0,16 0,0916 T34 0 0,0805 0,06 0,1025 T34 1 0,081 0,0596 0,076 T34 1.5 0,0806 0,0575 0,0643 T34 2 0,0983 0,0566 0,061 T38 0 0,0905 0,0713 0,0523 T38 1 0,0823 0,0926 0,1226 T38 1.5 0,0766 0,0866 0,0796 T38 2 0,0756 0,0636 0,0673 T50 0 0,0925 0,0766 0,0656 T50 1 0,0566 0,0596 0,0716 T50 1.5 0,0773 0,0593 0,0803 T50 2 0,0723 0,1173 0,107 T51 0 0,093 0,0433 0,0693 T51 1 0,062 0,063 0,08 T51 1.5 0,0563 0,063 0,0863 T51 2 0,063 0,071 0,0746 Ghi chú: 0, 1, 1,5, 2: nồng độ Toluene ở 0, 1 1,5 và 2 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học 2. Bảng 14: Kết quả thí nghiệm khả nẳng tạo enzyme của các dòng vi khuẩn Dòng Số lần lặp Enzyme amylase Enzyme protease cellulase Lipase T3 1 0,5 0,5 1,5 0,168 T3 2 0,4 0,4 1,3 0,166 T3 3 0,6 0,6 1,7 0,17 T4 1 2,8 0 2,4 0,064 T4 2 2,7 0 2,3 0,065 T4 3 2,9 0 2,5 0,063 T9 1 0,2 1,2 0,9 0,143 T9 2 0,1 1,4 0,8 0,14 T9 3 0,3 1 1 0,146 T12 1 1,6 0 2,5 0,042 T12 2 1,3 0 2,4 0,046 T12 3 1,9 0 2,6 0,038 T14 1 1,2 1,3 0,9 0,256 T14 2 1,1 1,5 0,7 0,25 T14 3 1,3 1,1 1,1 0,062 T34 1 0,6 0,3 0,8 0,135 T34 2 0,5 0,4 0,6 0,137 T34 3 0,7 0,2 1 0,133 T38 1 1,8 0 0,4 0,28 T38 2 1,6 0 0,5 0,27 T38 3 2 0 0,3 0,273 T50 1 0,9 1,1 1,95 0 T50 2 1,1 1,3 1,93 0 T50 3 0,7 0,9 1,97 0 T51 1 0,6 1,4 0,6 0,153 T51 2 0,5 1,6 0,5 0,15 T51 3 0,7 1,2 0,7 0,156 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học Phụ lục 3: Kết quả thống kê 1. Kết quả thống kê khả năng tạo enzyme protease Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học 2. Kết quả thống kê khả năng tạo enzyme lipase 3. Kết quả thống kê khả năng tạo enzyme cellulase Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 – 2013 Trường ĐHCT Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NCPT Công nghệ Sinh học 4. Kết quả thống kê khả năng tạo enzyme amylase